發(fā)布時(shí)間：2021-05-12 07:55

　　目的原核表達(dá)及純化森林腦炎病毒（tick-bome encephalitisvirus,TBEV）包膜E蛋白,并初步評(píng)價(jià)其免疫原性。方法采用RT-PCR法擴(kuò)增TBEV E蛋白基因,克隆至載體pET-28a,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-TBEV E,轉(zhuǎn)化感受態(tài)E. coli BL21（DE3）,挑取陽(yáng)性克隆,擴(kuò)增后經(jīng)終濃度為0. 1 mmol/L的IPTG誘導(dǎo),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)12%SDS-PAGE及Western blot鑒定。將鑒定正確的重組蛋白采用鎳柱親和法純化,鋁佐劑吸附后,經(jīng)小鼠左側(cè)腹腔注射,0. 5 mL/只,間隔1周加強(qiáng)免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,經(jīng)小鼠眼眶采血,分離血清,ELISA法測(cè)定小鼠血清抗體水平。結(jié)果經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,重組質(zhì)粒pET-28a-TBEV E構(gòu)建正確。表達(dá)產(chǎn)物相對(duì)分子質(zhì)量約55 000,主要以包涵體形式表達(dá),表達(dá)量約22. 3%,且可與小鼠抗TBEV血清發(fā)生特異反應(yīng),純化后純度達(dá)90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗體效價(jià)達(dá)最高,為1∶6 400。結(jié)論經(jīng)原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并純化了TBEV E蛋白,該蛋白具有較好... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2020,33(05)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、菌株及病毒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.5 TBEV E蛋白基因的擴(kuò)增
    1.6 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.7 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.8 重組蛋白的Western blot鑒定
    1.9 重組蛋白的純化
    1.1 0 動(dòng)物分組及給藥
    1.1 1 抗體水平測(cè)定
2 結(jié)果
    2.1 目的基因的鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 重組蛋白的鑒定
        2.3.1 SDS-PAGE分析
        2.3.2 Western blot分析
    2.4 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.5 重組蛋白的免疫原性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2010～2016年吉林省森林腦炎流行特征分析[J]. 鄧立權(quán),沈博,李亞明.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2017(10)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle.  World Journal of Clinical Cases. 2015(05)



本文編號(hào)：3183049