貝氏柯克斯體（Coxiella burnetii,Cb）是人類Q熱的病原體,主要通過氣溶膠傳播,對人和動物感染性強。人類感染Q熱主要表現(xiàn)為急性流感樣癥狀,以發(fā)熱、頭痛為主,可能會引起慢性感染^[1],最常見的是心內(nèi)膜炎^[2]。貝氏柯克斯體九里株源自美國^[3],是Q熱研究中常用的參考菌株^[4]。九里株在體外傳代培養(yǎng)時易發(fā)生變異,由有毒的I相菌變異為弱毒的Crazy相^[5]或無毒的II相^[6,7]。過去幾十年里一直認為貝氏柯克斯體是專性胞內(nèi)寄生菌,不能在細胞外培養(yǎng)。傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法主要是感染動物、雞胚培養(yǎng)和細胞培養(yǎng),2009年美國NIH落基山實驗室發(fā)明了貝氏柯克斯體無細胞培養(yǎng)方法^[8]。無細胞培養(yǎng)技術(shù)提高了貝氏柯克斯體的培養(yǎng)效率,并簡化了遺傳操作的方法^[8,9]。國外的研究發(fā)現(xiàn)貝氏柯克斯體是嚴格微好氧菌,無細胞培養(yǎng)需要一定濃度的氧氣,但是氧濃度不超過10%^[8,9,10]。本研究第一部分是對九里II... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
摘要
Abstract
前言
第一章 貝氏柯克斯體九里株Ⅱ相的分純與鑒定
    1.1 材料
        1.1.1 菌株
        1.1.2 儀器設(shè)備
        1.1.3 主要試劑及耗材
        1.1.4 主要試劑的配置
            1.1.4.1 2×ACCM-2
            1.1.4.2 超純瓊脂糖溶液
            1.1.4.3 3M乙酸鈉
            1.1.4.4 PBS緩沖液
    1.2 實驗方法
        1.2.1 貝氏柯克斯體九里株Ⅱ相的分純與培養(yǎng)
        1.2.2 基因組提取
        1.2.3 全基因組測序
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 CB01基因組測序結(jié)果分析
        1.3.2 與RSA493基因組的比較分析
        1.3.3 與RSA439基因組的比較分析
        1.3.4 大片段差異
    1.4 討論
第二章 貝氏柯克斯體兼性好氧突變體的分離與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及耗材
        2.1.4 重要試劑的配置
            2.1.4.1 2×ACCM-2和含色氨酸的2×ACCM-2
            2.1.4.2 LB培養(yǎng)基
            2.1.4.3 LB瓊脂平板
            2.1.4.4 TAE緩沖液
    2.2 方法
        2.2.1 貝氏柯克斯體的轉(zhuǎn)化和篩選
            2.2.1.1 制備需要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒p207GK
            2.2.1.2 制備貝氏柯克斯體化學(xué)感受態(tài)
            2.2.1.3 轉(zhuǎn)化和篩選
            2.2.1.4 克隆分純
            2.2.1.5 擴大培養(yǎng)與定量
        2.2.2 熒光定量PCR方法
        2.2.3 鑒定轉(zhuǎn)化菌的生長特性
            2.2.3.1 鑒定轉(zhuǎn)化菌NM ⅡpMMGK在兩種氧濃度條件下的培養(yǎng)特性
            2.2.3.2 測試轉(zhuǎn)化菌NM ⅡpMMGK在20%氧濃度中生長是否需要二氧化碳
            2.2.3.3 探索色氨酸對不同Cb菌株在20%氧濃度條件下培養(yǎng)的影響
            2.2.3.4 探索凍存和接種濃度對不同Cb菌株在20%氧濃度條件下培養(yǎng)的影響
            2.2.3.5 鑒定-pQ和-pBRQ是否可以在20%條件下生長
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 檢驗單克隆結(jié)果
        2.3.2 轉(zhuǎn)化菌NM ⅡpMMGK在20%氧濃度條件下的培養(yǎng)特性的初步鑒定
        2.3.3 轉(zhuǎn)化菌NM ⅡpMMGK在20%氧濃度條件下的培養(yǎng)特性的初步鑒定
        2.3.4 探索色氨酸對Cb在20%氧濃度條件下培養(yǎng)的影響
        2.3.5 探索凍存和接種濃度對Cb在20%氧濃度條件下培養(yǎng)的影響
        2.3.6 鑒定兩株質(zhì)粒缺失株是否可以在20%氧濃度條件下生長
    2.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻
主要簡歷
作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果
附件
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]貝氏柯克斯體穿梭載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化方法建立[J]. 羅聲棟,盧姍姍,胡燕,王濤,于永慧,馮樂,孫志會,宋立華.  生物技術(shù)通訊. 2016(05)
[2]第二代測序技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J]. 張丁予,章婷曦,王國祥.  環(huán)境科學(xué)與技術(shù). 2016(09)
[3]細菌產(chǎn)生的活性氧及其功能[J]. 劉武康,吳淑燕,陳國薇,張超,吳嫚,李森,劉箐.  微生物學(xué)雜志. 2016(01)
[4]表觀遺傳之染色質(zhì)重塑[J]. 丁健,王飛,金景姬,蔡勇.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2015(11)
[5]第三代測序技術(shù):單分子即時測序[J]. 劉巖,吳秉銓.  中華病理學(xué)雜志. 2011 (10)
[6]表觀遺傳學(xué)研究進展[J]. 李光雷,喻樹迅,范術(shù)麗,宋美珍,龐朝友.  生物技術(shù)通報. 2011(01)
[7]DNA測序技術(shù)的發(fā)展歷史與最新進展[J]. 解增言,林俊華,譚軍,舒坤賢.  生物技術(shù)通報. 2010(08)
[8]細菌中的群體感應(yīng)[J]. 鐘增濤,鄭會明,高軼靜,王卉,崔中利,李順鵬,朱軍.  生命的化學(xué). 2003(06)



本文編號：3183099