背景:Th2細(xì)胞及其細(xì)胞因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。IL-4及IL-13是重要的Th2型細(xì)胞因子,可以促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）、骨髓來(lái)源免疫抑制細(xì)胞（MDSC）及腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）向腫瘤部位的浸潤(rùn),下調(diào)Th1型反應(yīng)及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）抗腫瘤免疫應(yīng)答,促進(jìn)腫瘤免疫抑制微環(huán)境的形成。因此,靶向IL-4、IL-13具有改善腫瘤免疫抑制微環(huán)境,促進(jìn)抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞的產(chǎn)生、浸潤(rùn)及功能發(fā)揮,增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的潛力。腫瘤具備異質(zhì)性,其抗原多變,限制了針對(duì)腫瘤特異抗原的疫苗研發(fā)及其取得顯著臨床效果�；熓悄[瘤臨床治療的常用手段,化療藥物可直接殺傷腫瘤細(xì)胞并釋放大量腫瘤抗原,并且可能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞免疫原性死亡,可激發(fā)機(jī)體針對(duì)多重腫瘤抗原產(chǎn)生抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答,但這一免疫效應(yīng)往往受限于腫瘤免疫抑制機(jī)制的影響。目的:利用小鼠乳腺腫瘤模型,旨在探討靶向IL-4及IL-13主動(dòng)免疫對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及免疫應(yīng)答的調(diào)控潛能,同時(shí)探討其與化療藥物殺傷腫瘤及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞免疫原性死亡這一效應(yīng)可能的協(xié)同作用。研究將有助于揭示IL-4與IL-13在腫瘤中的角色,并為腫瘤免疫治療提供新的策略。方法:本研... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 研究背景
        1.1 腫瘤微環(huán)境
        1.2 Th1/Th2平衡
        1.3 IL-4和IL-13的功能
        1.4 病毒樣顆粒和抗細(xì)胞因子疫苗
        1.5 腫瘤免疫原性死亡
    2. 研究?jī)?nèi)容、目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 質(zhì)粒、菌株及細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 酶、抗體和引物
        2.1.5 相關(guān)化學(xué)試劑及實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.6 相關(guān)儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 重組質(zhì)粒HBcAg-IL-4/IL13及HBcAg-IL13/ILA構(gòu)建
        2.2.2 重組質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.3 重組蛋白病毒樣顆粒的純化
        2.2.4 病毒樣顆粒(VLPs)的鑒定
        2.2.5 蛋白質(zhì)定量
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 4T1腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.8 小鼠腫瘤模型的建立
            2.2.8.1 小鼠4T1原位乳腺癌模型建立
            2.2.8.2 小鼠4T1乳腺痛移模型建立
        2.2.9 病毒樣顆粒免疫效果評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 小鼠肺灌洗液的獲取、肺部浸潤(rùn)細(xì)胞的計(jì)數(shù)和肺部染色
        2.2.11 血清IgG1和IgG2a的檢測(cè)
        2.2.12 血清中特異的IgG抗體水平檢測(cè)及抗體滴度的測(cè)定
        2.2.13 分離小鼠脾臟淋巴細(xì)胞
        2.2.14 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子的表達(dá)
        2.2.15 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CTL細(xì)胞水平
        2.2.16 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th1細(xì)胞水平
        2.2.17 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th2細(xì)胞水平
        2.2.18 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Treg細(xì)胞水平
        2.2.19 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MDSCs細(xì)胞水平
        2.2.20 腫瘤組織qPCR檢測(cè)
        2.2.21 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 重組質(zhì)粒pHBcAg-IL-4/IL-13及pHBcAg-IL-13/IL-4構(gòu)建
    3.2 重組蛋白HBcAg-IL-4/IL-13及HBcAg-IL-13/IL-4的誘導(dǎo)表達(dá)與可溶性鑒定
    3.3 重組蛋白的純化
        3.3.1 硫酸銨鹽析法初步純化
        3.3.2 蔗糖密度梯度離心進(jìn)一步純化VLPs蛋白
    3.4 病毒樣顆粒的鑒定
        3.4.1 HPLC分析病毒樣顆粒純度
        3.4.2 電鏡鑒定病毒樣顆粒
    3.5 Western Blot
    3.6 重組VLPs免疫小鼠后抗體水平檢測(cè)
    3.7 抗IL-4及IL-13預(yù)防性免疫對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移模型的干預(yù)
        3.7.1 單獨(dú)免疫HBcAg-IL-13或HBcAg-IL-4對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移的干預(yù)
        3.7.2 同時(shí)免疫HBcAg-IL-13和HBcAg-IL-4對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移的干預(yù)
    3.8 靶向IL-4與IL-13免疫對(duì)小鼠乳腺癌原位腫瘤生長(zhǎng)的影響
        3.8.1 免疫HBcAg-IL-13對(duì)小鼠乳腺癌原位腫瘤的干預(yù)
        3.8.2 同時(shí)免疫HBcAg-IL-13和HBcAg-IL-4對(duì)小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移的干預(yù)
    3.9 HBcAg-IL-4與HBcAg-IL-13 VLPs主動(dòng)免疫聯(lián)合米托蒽醌的抗腫瘤效應(yīng)
結(jié)論
討論
展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄Ⅰ 英文縮寫詞
    附錄Ⅱ 主要溶液的配制
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙肝病毒核心抗原作為載體用于病毒樣顆粒疫苗研究的主要進(jìn)展[J]. 楊星鈺,薄洪,舒躍龍.  病毒學(xué)報(bào). 2012(03)



本文編號(hào)：3183010