本文關(guān)鍵詞：NDM-1的純化、表征以及在細(xì)菌活細(xì)胞體內(nèi)活性的實時檢測及其抑制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)菌耐藥日益嚴(yán)重,而細(xì)菌耐藥靶蛋白金屬β-內(nèi)酰胺酶是人們目前關(guān)注的焦點。近年,金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1已導(dǎo)致臨床醫(yī)學(xué)危機,因為NDM-1能水解幾乎所有的抗生素。更嚴(yán)重的是,攜帶NDM-1基因的質(zhì)粒能夠在不同的細(xì)菌中穿梭,而使得耐藥細(xì)菌迅速地擴散傳播。如何應(yīng)對細(xì)菌耐藥,人們需要深入研究金屬β-內(nèi)酰胺酶,使用新的手段檢測金屬β-內(nèi)酰胺酶,合成和發(fā)展酶的抑制劑。基于這一理念,本文進(jìn)行了如下的研究工作：1.在普通大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)并純化了“超級細(xì)菌”耐藥靶蛋白NDM-1；純化所得蛋白經(jīng)聚丙烯凝膠電泳確認(rèn)并進(jìn)行了紫外表征；在制備apo-NDM-1的基礎(chǔ)上,重組Co(Ⅱ)-NDM-1并對其進(jìn)行光譜表征。酶動力學(xué)評價NDM·1水解三類β-內(nèi)酰胺類抗生素之代表,包括先鋒V、亞胺培南及氨芐青霉素。對實驗室合成的八種化合物進(jìn)行了酶抑制動力學(xué)篩選。2.設(shè)計發(fā)展了一種紫外-可見光譜的監(jiān)測方法,用于實時監(jiān)測細(xì)菌活細(xì)菌體內(nèi)金屬β-內(nèi)酰胺酶的活性。研究了細(xì)菌活細(xì)胞體內(nèi)NDM-1的活性,實時監(jiān)測了EDTA,D-脯氨酸以及實驗室合成的一種抑制劑對產(chǎn)NDM-1細(xì)菌的抑制作用。3.設(shè)計并合成了兩個金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物,對其進(jìn)行了光譜表征。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)菌耐藥 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1 細(xì)菌活體細(xì)胞檢測 熒光底物
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 第一章 緒論9-29
• 1.1 抗生素及細(xì)菌耐藥9-12
• 1.2 β-內(nèi)酰胺酶介紹12-13
• 1.3 金屬β-內(nèi)酰胺酶13-20
• 1.3.1 金屬β-內(nèi)酰胺酶的分類14-18
• 1.3.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶的檢測18-19
• 1.3.3 金屬β-內(nèi)酰胺酶抑制劑19-20
• 1.4 選題意義及研究內(nèi)容20-22
• 參考文獻(xiàn)22-29
• 第二章 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1的表達(dá)純化及其表征29-46
• 2.1 研究背景29-30
• 2.2 實驗所用材料及儀器設(shè)備30-34
• 2.2.1 實驗材料及試劑30-31
• 2.2.2 所用儀器設(shè)備31-32
• 2.2.3 所用溶液及其配制方法32-34
• 2.3 實驗部分34-39
• 2.3.1 含NDM-1基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化34-35
• 2.3.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1的表達(dá)35-36
• 2.3.3 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1的純化36
• 2.3.4 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1的表征36-39
• 2.4 結(jié)果與討論39-44
• 2.4.1 純化蛋白的凝膠電泳39-40
• 2.4.2 NDM-1紫外光譜及熒光光譜40-41
• 2.4.3 NDM-1水解各類抗生素41-43
• 2.4.4 NDM-1抑制動力學(xué)及抑制劑篩選43-44
• 2.5 本章小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-46
• 第三章 金屬β-內(nèi)酰胺酶NDM-1在細(xì)菌活細(xì)胞體內(nèi)活性的實時監(jiān)測與抑制研究46-62
• 3.1 研究背景46-47
• 3.2 實驗所用材料及儀器設(shè)備47-48
• 3.2.1 實驗所用材料47-48
• 3.2.2 實驗所用儀器設(shè)備48
• 3.3 實驗部分48-51
• 3.3.1 實驗用活體細(xì)菌準(zhǔn)備48-49
• 3.3.2 產(chǎn)NDM-1細(xì)菌水解抗生素的紫外監(jiān)測方法49
• 3.3.3 產(chǎn)NDM-1細(xì)菌抑制的紫外實時監(jiān)測研究49-51
• 3.3.4 先鋒V在不同細(xì)菌環(huán)境中的紫外水解表現(xiàn)51
• 3.4 結(jié)果與討論51-59
• 3.4.1 產(chǎn)NDM-1大腸桿菌水解抗生素的實驗結(jié)果與討論51-52
• 3.4.2 產(chǎn)NDM-1大腸桿菌水解先鋒V的對比實驗52-55
• 3.4.3 產(chǎn)NDM-1大腸桿菌水解先鋒V被抑制的實驗結(jié)果與討論55-58
• 3.4.4 產(chǎn)NDM-1大腸桿菌之活力檢測的實驗結(jié)果58
• 3.4.5 先鋒V在不同細(xì)菌環(huán)境中水解的紫外表現(xiàn)與討論58-59
• 3.5 本章小結(jié)59-61
• 參考文獻(xiàn)61-62
• 第四章 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的合成62-70
• 4.1 研究背景62-63
• 4.1.1 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的簡述62
• 4.1.2 實驗設(shè)計思路62-63
• 4.2 實驗所用儀器及試劑63-64
• 4.3 實驗部分64-67
• 4.3.1 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的合成64-67
• 4.3.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的光譜檢測67
• 4.4 結(jié)果與討論67-68
• 4.4.1 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的合成67
• 4.4.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶之頭孢類熒光底物的光譜檢測67-68
• 4.5 本章小結(jié)68-69
• 參考文獻(xiàn)69-70
• 全文總結(jié)70-72
• 附錄72-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果76-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉軍鋒;賈克剛;劉運德;;細(xì)菌耐藥機制的研究進(jìn)展[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2006年11期

2 徐冬梅;;細(xì)菌耐藥性研究[J];河北化工;2009年06期

3 黨京丹;;細(xì)菌耐藥機制研究新進(jìn)展[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2009年09期

  本文關(guān)鍵詞：NDM-1的純化、表征以及在細(xì)菌活細(xì)胞體內(nèi)活性的實時檢測及其抑制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：315593