本文關(guān)鍵詞：腎上腺髓質(zhì)素對離體小膠質(zhì)細(xì)胞的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)背景和意義：腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin, AM)最早是從人的嗜鉻細(xì)胞瘤中分離到的多肽類激素,具有多種生物學(xué)功能,后來的研究證實(shí)AM是降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)家族的一個成員,和著名的疼痛相關(guān)肽CGRP氨基酸序列和三維結(jié)構(gòu)上有著相似性。近階段研究證實(shí)AM是一種疼痛相關(guān)肽,參與疼痛調(diào)節(jié)過程,但機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究以實(shí)驗(yàn)室過去的在體模型的研究工作為基礎(chǔ),得出AM能活化小膠質(zhì)細(xì)胞這一推論,為證實(shí)這一推論,我們建立了一種離體培養(yǎng)高純度小膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法,然后研究AM對小膠質(zhì)細(xì)胞的作用。實(shí)驗(yàn)方法：建立小膠質(zhì)細(xì)胞的離體原代培養(yǎng)技術(shù),并以此為基礎(chǔ),進(jìn)一步研究不同濃度的AM對小膠質(zhì)細(xì)胞的作用,通過實(shí)時定量PCR技術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法,檢測小膠質(zhì)細(xì)胞的AM受體和CGRP受體的表達(dá)變化和小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的變化。研究結(jié)果：建立小膠質(zhì)細(xì)胞離體原代培養(yǎng)技術(shù),對比了經(jīng)典的小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)法和營養(yǎng)饑餓處理的培養(yǎng)法,對比經(jīng)典恒溫振蕩法、利多卡因分離法2種分離方法優(yōu)劣,選取能夠獲得高純度,高質(zhì)量,數(shù)量多的小膠質(zhì)細(xì)胞的改進(jìn)于經(jīng)典恒溫振蕩法的饑餓培養(yǎng)震蕩法作為本實(shí)驗(yàn)純化小膠質(zhì)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。檢測不同濃度AM(1-100 nM)和AM不同作用時間(1 d、3d)時,10 nM和100 nM AM濃度下作用3d后,小膠質(zhì)細(xì)胞胞體變大,突起回縮。小膠質(zhì)細(xì)胞的AM受體和CGRP受體的表達(dá)上調(diào)。研究結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：①在培養(yǎng)過程中加入饑餓處理這一過程有助于獲得更多的,狀態(tài)好的小膠質(zhì)細(xì)胞。②AM能夠使小膠質(zhì)細(xì)胞表面的AM受體和CGRP受體的mRNA表達(dá)增加。③AM能引起小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞功能的改變。
【關(guān)鍵詞】：腎上腺髓質(zhì)素 小膠質(zhì)細(xì)胞 OX-42 腎上腺髓質(zhì)素受體 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-4
• 中文文摘4-9
• 緒論9-19
• 1 腎上腺髓質(zhì)素及其受體9-12
• 1.1 腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin)9-10
• 1.2 腎上腺髓質(zhì)素受體10-11
• 1.3 AM及受體與疼痛11-12
• 2 膠質(zhì)細(xì)胞(Glial cell)12-17
• 2.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)13
• 2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)13-17
• 2.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的活化與疼痛14-17
• 3 本課題的立題意義17-19
• 第一章 小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)、分離純化及純度鑒定19-35
• 前言19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物19-20
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和器材工具20
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑20
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)所需的部分試劑、溶液的配制20-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 1.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)21-22
• 1.2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的純化22-24
• 1.2.3 小膠質(zhì)細(xì)胞純度鑒定24
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理24-25
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-30
• 1.4.1 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)25-27
• 1.4.2 純化出的小膠質(zhì)細(xì)胞27-28
• 1.4.3 小膠質(zhì)細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定28-29
• 1.4.4 小膠質(zhì)細(xì)胞的純度統(tǒng)計29-30
• 1.5 討論30-35
• 第二章 AM對小膠質(zhì)細(xì)胞的作用——小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)變化35-45
• 前言35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料35-37
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物35
• 2.1.2 主要試驗(yàn)儀器和器材工具35-36
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑36
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需部分試劑的配制36-37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 2.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)和分離純化37-38
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組和藥物處理38
• 2.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色38-39
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-43
• 2.3.1 給藥AM后小膠質(zhì)細(xì)胞的顯微觀察39-41
• 2.3.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定41-43
• 2.4 討論43-45
• 第三章 AM對小膠質(zhì)細(xì)胞的作用——AM受體的表達(dá)變化45-63
• 前言45
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料45-49
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物45-46
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和器材工具46
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑46
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)所需的部分試劑、溶液的配制46-47
• 3.1.5 本章實(shí)驗(yàn)所需引物序列47-48
• 3.1.6 實(shí)驗(yàn)中所使用的引物序列與NCBI的基因庫中該基因序列的對比48-49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法49-54
• 3.2.1 小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)49-50
• 3.2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞的分離純化50
• 3.2.3 小膠質(zhì)細(xì)胞的純培養(yǎng)和藥物處理50-51
• 3.2.4 實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)51-54
• 3.3 統(tǒng)計學(xué)處理54-55
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果55-61
• 3.4.1 RNA完整性檢測結(jié)果55
• 3.4.2 引物擴(kuò)增效率的鑒定55-56
• 3.4.3 實(shí)時熒光定量PCR產(chǎn)物的特異性鑒定56-57
• 3.4.3.1 實(shí)時定量PCR實(shí)驗(yàn)的熔解曲線56-57
• 3.4.3.2 實(shí)時定量PCR產(chǎn)物的電泳圖譜57
• 3.4.4 AM受體和CGRP受體的mRNA的相對表達(dá)量57-61
• 3.5 討論61-63
• 第四章 結(jié)論63-65
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果71-73
• 致謝73-75
• 個人簡歷75-79

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