發(fā)布時間：2017-04-18 18:08

  本文關(guān)鍵詞：腎上腺髓質(zhì)素對離體小膠質(zhì)細胞的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實驗背景和意義：腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin, AM)最早是從人的嗜鉻細胞瘤中分離到的多肽類激素,具有多種生物學功能,后來的研究證實AM是降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)家族的一個成員,和著名的疼痛相關(guān)肽CGRP氨基酸序列和三維結(jié)構(gòu)上有著相似性。近階段研究證實AM是一種疼痛相關(guān)肽,參與疼痛調(diào)節(jié)過程,但機制尚不明確。本實驗研究以實驗室過去的在體模型的研究工作為基礎,得出AM能活化小膠質(zhì)細胞這一推論,為證實這一推論,我們建立了一種離體培養(yǎng)高純度小膠質(zhì)細胞的細胞培養(yǎng)方法,然后研究AM對小膠質(zhì)細胞的作用。實驗方法：建立小膠質(zhì)細胞的離體原代培養(yǎng)技術(shù),并以此為基礎,進一步研究不同濃度的AM對小膠質(zhì)細胞的作用,通過實時定量PCR技術(shù)和免疫細胞化學染色的方法,檢測小膠質(zhì)細胞的AM受體和CGRP受體的表達變化和小膠質(zhì)細胞形態(tài)的變化。研究結(jié)果：建立小膠質(zhì)細胞離體原代培養(yǎng)技術(shù),對比了經(jīng)典的小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)法和營養(yǎng)饑餓處理的培養(yǎng)法,對比經(jīng)典恒溫振蕩法、利多卡因分離法2種分離方法優(yōu)劣,選取能夠獲得高純度,高質(zhì)量,數(shù)量多的小膠質(zhì)細胞的改進于經(jīng)典恒溫振蕩法的饑餓培養(yǎng)震蕩法作為本實驗純化小膠質(zhì)細胞的實驗技術(shù)。檢測不同濃度AM(1-100 nM)和AM不同作用時間(1 d、3d)時,10 nM和100 nM AM濃度下作用3d后,小膠質(zhì)細胞胞體變大,突起回縮。小膠質(zhì)細胞的AM受體和CGRP受體的表達上調(diào)。研究結(jié)論：實驗結(jié)果表明：①在培養(yǎng)過程中加入饑餓處理這一過程有助于獲得更多的,狀態(tài)好的小膠質(zhì)細胞。②AM能夠使小膠質(zhì)細胞表面的AM受體和CGRP受體的mRNA表達增加。③AM能引起小膠質(zhì)細胞細胞形態(tài)和細胞功能的改變。
【關(guān)鍵詞】：腎上腺髓質(zhì)素 小膠質(zhì)細胞 OX-42 腎上腺髓質(zhì)素受體 qRT-PCR
【學位授予單位】：福建師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-4
• 中文文摘4-9
• 緒論9-19
• 1 腎上腺髓質(zhì)素及其受體9-12
• 1.1 腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin)9-10
• 1.2 腎上腺髓質(zhì)素受體10-11
• 1.3 AM及受體與疼痛11-12
• 2 膠質(zhì)細胞(Glial cell)12-17
• 2.1 星形膠質(zhì)細胞(astrocyte)13
• 2.2 小膠質(zhì)細胞(microglia)13-17
• 2.2.1 小膠質(zhì)細胞的活化與疼痛14-17
• 3 本課題的立題意義17-19
• 第一章 小膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)、分離純化及純度鑒定19-35
• 前言19
• 1.1 實驗材料19-21
• 1.1.1 實驗動物19-20
• 1.1.2 實驗儀器和器材工具20
• 1.1.3 主要實驗試劑20
• 1.1.4 實驗所需的部分試劑、溶液的配制20-21
• 1.2 實驗方法21-24
• 1.2.1 小膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)21-22
• 1.2.2 小膠質(zhì)細胞的純化22-24
• 1.2.3 小膠質(zhì)細胞純度鑒定24
• 1.3 統(tǒng)計學處理24-25
• 1.4 實驗結(jié)果25-30
• 1.4.1 神經(jīng)膠質(zhì)細胞混合培養(yǎng)25-27
• 1.4.2 純化出的小膠質(zhì)細胞27-28
• 1.4.3 小膠質(zhì)細胞免疫細胞化學鑒定28-29
• 1.4.4 小膠質(zhì)細胞的純度統(tǒng)計29-30
• 1.5 討論30-35
• 第二章 AM對小膠質(zhì)細胞的作用——小膠質(zhì)細胞的形態(tài)變化35-45
• 前言35
• 2.1 實驗材料35-37
• 2.1.1 實驗動物35
• 2.1.2 主要試驗儀器和器材工具35-36
• 2.1.3 主要實驗試劑36
• 2.1.4 實驗所需部分試劑的配制36-37
• 2.2 實驗方法37-39
• 2.2.1 小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)和分離純化37-38
• 2.2.2 實驗分組和藥物處理38
• 2.2.3 免疫細胞化學染色38-39
• 2.3 實驗結(jié)果39-43
• 2.3.1 給藥AM后小膠質(zhì)細胞的顯微觀察39-41
• 2.3.2 小膠質(zhì)細胞的免疫細胞化學染色鑒定41-43
• 2.4 討論43-45
• 第三章 AM對小膠質(zhì)細胞的作用——AM受體的表達變化45-63
• 前言45
• 3.1 實驗材料45-49
• 3.1.1 實驗動物45-46
• 3.1.2 實驗儀器和器材工具46
• 3.1.3 主要實驗試劑46
• 3.1.4 實驗所需的部分試劑、溶液的配制46-47
• 3.1.5 本章實驗所需引物序列47-48
• 3.1.6 實驗中所使用的引物序列與NCBI的基因庫中該基因序列的對比48-49
• 3.2 實驗方法49-54
• 3.2.1 小膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)49-50
• 3.2.2 小膠質(zhì)細胞的分離純化50
• 3.2.3 小膠質(zhì)細胞的純培養(yǎng)和藥物處理50-51
• 3.2.4 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)51-54
• 3.3 統(tǒng)計學處理54-55
• 3.4 實驗結(jié)果55-61
• 3.4.1 RNA完整性檢測結(jié)果55
• 3.4.2 引物擴增效率的鑒定55-56
• 3.4.3 實時熒光定量PCR產(chǎn)物的特異性鑒定56-57
• 3.4.3.1 實時定量PCR實驗的熔解曲線56-57
• 3.4.3.2 實時定量PCR產(chǎn)物的電泳圖譜57
• 3.4.4 AM受體和CGRP受體的mRNA的相對表達量57-61
• 3.5 討論61-63
• 第四章 結(jié)論63-65
• 參考文獻65-71
• 攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果71-73
• 致謝73-75
• 個人簡歷75-79

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本文編號：315443