目的收集27例葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變的臨床外周血樣本,建立永生化淋巴細(xì)胞系。方法采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變檢測(cè)試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）篩查臨床樣本的突變類型,然后采集外周血,進(jìn)行永生化淋巴細(xì)胞系的轉(zhuǎn)化。提取建系成功的淋巴細(xì)胞系的基因組DNA,并用建立的二代測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果成功建立了27例葡萄糖-6-磷酸脫氫酶永生化淋巴細(xì)胞系樣本,包括14種不同純合和雜合突變類型,驗(yàn)證結(jié)果表明永生化淋巴細(xì)胞系的基因突變類型與臨床樣本原來(lái)標(biāo)示的突變類型一致。結(jié)論本研究建立的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變永生化淋巴細(xì)胞系具有穩(wěn)定的遺傳信息,可以作為國(guó)家參考品的資源,用于評(píng)價(jià)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變?cè)噭┖械男阅堋?nbsp;

【文章來(lái)源】：分子診斷與治療雜志. 2020,12(04)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

CNGB030108樣本篩查結(jié)果

用基因組DNA提取試劑盒提取的永生化淋巴細(xì)胞系樣本基因組DNA，使用0.8%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示DNA條帶完整，沒(méi)有拖帶或彌散帶，表明基因組DNA具有很好的完整性。采用高通量測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證，樣本的結(jié)果均與采用熒光PCR熔解曲線法篩查的結(jié)果一致，見(jiàn)圖3和表2。CNGB030108樣本的測(cè)序結(jié)果顯示在X染色體153 762 678 bp（人類基因組hg19）位置處檢測(cè)到94條reads支持C堿基（正向是G堿基）和108條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.519 C>T雜合突變；在X染色體153 760484 bp位置處檢測(cè)到60條reads支持G堿基（正向是C堿基）和68條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.1 376 G>T雜合突變。

采用高通量測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證，樣本的結(jié)果均與采用熒光PCR熔解曲線法篩查的結(jié)果一致，見(jiàn)圖3和表2。CNGB030108樣本的測(cè)序結(jié)果顯示在X染色體153 762 678 bp（人類基因組hg19）位置處檢測(cè)到94條reads支持C堿基（正向是G堿基）和108條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.519 C>T雜合突變；在X染色體153 760484 bp位置處檢測(cè)到60條reads支持G堿基（正向是C堿基）和68條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.1 376 G>T雜合突變。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
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