目的收集27例葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變的臨床外周血樣本,建立永生化淋巴細胞系。方法采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變檢測試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）篩查臨床樣本的突變類型,然后采集外周血,進行永生化淋巴細胞系的轉(zhuǎn)化。提取建系成功的淋巴細胞系的基因組DNA,并用建立的二代測序法進行驗證。結(jié)果成功建立了27例葡萄糖-6-磷酸脫氫酶永生化淋巴細胞系樣本,包括14種不同純合和雜合突變類型,驗證結(jié)果表明永生化淋巴細胞系的基因突變類型與臨床樣本原來標示的突變類型一致。結(jié)論本研究建立的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變永生化淋巴細胞系具有穩(wěn)定的遺傳信息,可以作為國家參考品的資源,用于評價葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變試劑盒的性能。 

【文章來源】：分子診斷與治療雜志. 2020,12(04)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

CNGB030108樣本篩查結(jié)果

用基因組DNA提取試劑盒提取的永生化淋巴細胞系樣本基因組DNA，使用0.8%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示DNA條帶完整，沒有拖帶或彌散帶，表明基因組DNA具有很好的完整性。采用高通量測序法進行驗證，樣本的結(jié)果均與采用熒光PCR熔解曲線法篩查的結(jié)果一致，見圖3和表2。CNGB030108樣本的測序結(jié)果顯示在X染色體153 762 678 bp（人類基因組hg19）位置處檢測到94條reads支持C堿基（正向是G堿基）和108條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.519 C>T雜合突變；在X染色體153 760484 bp位置處檢測到60條reads支持G堿基（正向是C堿基）和68條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.1 376 G>T雜合突變。

采用高通量測序法進行驗證，樣本的結(jié)果均與采用熒光PCR熔解曲線法篩查的結(jié)果一致，見圖3和表2。CNGB030108樣本的測序結(jié)果顯示在X染色體153 762 678 bp（人類基因組hg19）位置處檢測到94條reads支持C堿基（正向是G堿基）和108條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.519 C>T雜合突變；在X染色體153 760484 bp位置處檢測到60條reads支持G堿基（正向是C堿基）和68條reads支持T堿基（正向是A堿基），表明是c.1 376 G>T雜合突變。3 討論

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3101042