研究背景:黑色素細胞來源于神經(jīng)嵴。隨著胚胎的發(fā)育,神經(jīng)嵴細胞及其產(chǎn)物通過背外側(cè)、腹外側(cè)途徑形成成黑素細胞,向毛囊、表皮、眼葡萄膜、軟腦膜和內(nèi)耳遷移,使毛發(fā)和皮膚著色并且參與聽力和視力的調(diào)節(jié)。當黑色素細胞系發(fā)育障礙時,會引起聽力、視力的喪失,皮膚色素沉著障礙性疾病以及黑色素瘤。環(huán)境污染、內(nèi)在毒素均能影響黑色素細胞的發(fā)育。上述疾病的研究及毒理學評價工作的開展均可以黑色素細胞和黑色素干細胞作為種子來源,但其體外傳代能力有限,易于分化,滿足不了細胞生物學研究的需求。PBX1是細胞轉(zhuǎn)錄因子,可維持干細胞的自我更新及干性,且具有促進細胞增殖作用。研究目的:研究過表達PBX1對人皮膚黑色素（干）細胞的增殖作用,探討過表達PBX1促進人皮膚黑色素（干）細胞增殖的相關(guān)機制。研究方法:1.人皮膚黑色素（干）細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定取行包皮環(huán)切術(shù)的成年人、青少年包皮組織,分別把組織剪切成1 mm×1 cm大小,浸泡于DispaseⅡ溶液中,4℃冰箱過夜,分離真、表皮組織。次日,用含EDTA的0.25%胰酶消化表皮組織,獲取細胞,離心后用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,RT-PCR、免疫熒光、Western Blot方法檢... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

黑色素細胞來源模式圖

用鑷子將真皮、表皮剝離。由圖 3.1 可見：表皮部分顏色比較黑，如圖 3A；真皮部分呈現(xiàn)肉色，如圖 3.1-B。用 0.25 %（含 EDTA）胰酶對表皮組織行消化處理，分離獲取的細胞置于 21cm2培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，即原代細胞，3 周可見細胞呈兩極或多極形狀以及鵝卵石狀排列，如圖 3.1-C。細胞傳代，在選培養(yǎng)基 MK 篩選下鵝卵石狀排列的細胞基本消失，如 3.1-D。A.組織(表皮部分) B.組織（真皮部分)

第 3 章 實驗結(jié)果3.2 RT-PCR 檢測分離培養(yǎng)的人皮膚黑色素細胞相關(guān)基因通過文獻查找人源 TYR 、TYRP1、TYRP2、C-KIT、MITF、PAX3、GAPDH基因特異性擴增引物。在 NCBI 引物庫中上查找 SOX10 基因擴增引物。提取細胞總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，利用 PCR 技術(shù)擴增出基因序列，將擴增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳分離，如圖 3.2。

【參考文獻】：
期刊論文
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