發(fā)布時間：2021-03-11 02:40

　　第一部分心臟移植急性排斥反應(yīng)淋巴細胞趨化性測定與淋巴細胞-微泡復(fù)合物構(gòu)建背景:急性排斥反應(yīng)是心臟移植術(shù)后的重要并發(fā)癥,目前臨床尚無有效的無創(chuàng)影像檢測方法。心臟移植急性排斥反應(yīng)主要由淋巴細胞介導(dǎo)。本研究擬利用淋巴細胞構(gòu)建靶向超聲探針,以期進行心臟移植急性排斥反應(yīng)超聲顯像。方法:手術(shù)構(gòu)建大鼠心臟移植模型。①異基因移植組:Brown Norway大鼠為供體,Lewis大鼠為受體;同基因移植組:Lewis大鼠同為供體和受體;②心臟移植受體體內(nèi)輸入DiR標記的淋巴細胞,2小時后離體熒光成像,觀察DiR-淋巴細胞在心臟移植受體各器官中的分布;③異基因移植受體體內(nèi)輸入DiI標記的淋巴細胞,15分鐘后移植心臟切片,觀察DiI-淋巴細胞血管粘附和組織浸潤情況;④制備抗大鼠CD4抗體修飾的微泡（MBCD4）,MBCD4與大鼠脾臟淋巴細胞孵育,構(gòu)建淋巴細胞-微泡復(fù)合物（cell-MBs）,光鏡下觀察cell-MBs形態(tài)并測量粒徑。結(jié)果:①心臟移植受體輸入DiR-淋巴細胞2小時后,異基因移植心臟DiR熒光強度顯著高于同基因移植心臟（p<0.05）;②異基因移植受體輸入DiI-淋巴細胞15分鐘后,免疫熒光... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１實驗設(shè)計示意圖

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文??？?Ｎａｔｉｖｅ??ＨｅａｒｔＴＸ?ｈｅａｒｔ?Ｌｉｖｅｒ?Ｓｐｌｅｅｎ?Ｌｕｎｇ?Ｋｉｄｎｅｙ??Ｂ??＂〇?１００?￣｜?Ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ?ｍｏｄｅｌｓ??＾?＂?Ｉ￣Ｉ?Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ?ｍｏｄｅｌｓ??＞８０－??％?＊??ｃ?■?Ｉ?１??１?６０－?＿??４０－?■■?■■??１?ＪＬＵ＿??Ｈｅａｒｔｙ?Ｎａｔｉｖｅ?ｈｅａｒｔｓ??圖２?ＤｉＲ－淋巴細胞向異基因移植心臟趨化。（Ａ）?ＤｉＲ－淋巴細胞于輸入心臟移植受體２小時后在受??體器官的分布情況。（Ｂ）移植心臟與原位心臟ＤｉＲ熒光強度定量分析。＊為兩者比較ｐ＜?０．０１。??于心臟移植大鼠受體輸入ＤｉＲ標記的淋巴細胞２小時后，器官離體熒光成像顯示??ＤｉＲ－淋巴細胞蟲要分布于肝和脾，而其在異基因移植心臟的熒光強度明顯高于同基因??移植心臟（圖２Ａ）。圖２Ｂ定量锫果顯示異基因移植心臟的熒光強度約高出同基因移??植心臟３０％，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異ｓ原位心臟的熒光強度在兩組間無顯著性差異。??（２）切片免疫焚光檢査??２８??

華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文??Ａ?Ｂ??■?Ｈ??圖３淋巴細胞體外顯微鏡圖片。（Ａ）相差顯微鏡下大鼠脾臟淋巴細胞，標尺為１０叫。（Ｂ）激??光共聚焦顯微鏡下Ｄｉｌ標記的淋巴細胞，標尺為１５卩皿。??ＤＡＰＩ?ＦＩＴＣ－ＣＤ３１?Ｄｉｌ－ｃｅｌｌｓ?ＤＡＰＩ／ＦＩＴＣ／Ｄｉｌ??ＨＵ??■■■Ｂ??■■■■??圖４?Ｄｉｌ－淋巴細胞輸入異基因心臟移植受體１５分鐘后在移植心臟內(nèi)。第二排和第三排分別顯示??Ｄｉｌ－淋巴細胞在移植心臟血管內(nèi)皮粘附（粗箭頭）和組織間隙浸潤（細箭頭）。標尺為１０?ｐｎ。??Ｄｉｌ為親脂類幾化青染料，主要對細胞的細胞膜進行染色（圖Ｄｉｌ－淋巴細胞??尾靜脈輸入異基因移植受體１５分鐘后，移植心臟切片免疫熒光染色顯示Ｄｉｌ－淋巴細??胞己與異基因移植心臟血管內(nèi)皮粘附，更有甚者，己浸潤到心肌組織間質(zhì)（圖４）。??３、Ｃｅｌｌ－ＭＢｓ?構(gòu)建??（１）制備?ＭＢｃｄ４??ＦＩＴＣ標記的山羊抗小鼠ＩｇＧ抗體與ＭＢｃｒｎ孵育，共聚焦、顯微鏡下可見微泡上綠??２９??


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