目的探究寨卡病毒（ZIKV）感染A549細(xì)胞后誘導(dǎo)的小分子非編碼RNA-133a-3p（miR-133a-3p）對ZIKV復(fù)制的影響及其潛在機制。方法在1×10⁵/mL腺癌人類肺泡基底上皮細(xì)胞系A(chǔ)549中感染ZIKV,感染復(fù)數(shù)（MOI）為0.5,感染后在不同時間點收取RNA樣品,以熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測miR-133a-3p相對表達變化;同時在1×10⁵/mL的A549中,轉(zhuǎn)染3μL的miR-133a-3p模擬物（miR-133a-3p mimic）使miR-133a-3p高表達,轉(zhuǎn)染后24 h,接種MOI=0.5的ZIKV或用終濃度為100μg/L的polyⅠ∶C處理細(xì)胞,感染后48 h收取細(xì)胞RNA或蛋白樣品,通過RT-qPCR和蛋白質(zhì)印跡法（Western blots）檢測ZIKV的RNA的復(fù)制水平及宿主抗病毒先天免疫相關(guān)基因表達水平;將1μg含干擾素刺激應(yīng)答元件（ISRE）的螢火蟲熒光報告質(zhì)粒（ISRE-luc）和50 ng海腎熒光報告質(zhì)粒（pRL-TK）與3μL的miR-133a-3p共轉(zhuǎn)入1×10⁵

【文章來源】：中國輸血雜志. 2020,33(04)

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【部分圖文】：

ZIKV感染A549細(xì)胞后的病毒復(fù)制和上調(diào)miR-133a-3p高表達 (n≥3, x ˉ ±s)

RT-qPCR檢測miR-133a-3p相對表達量:miR-133a-3p mimic組的相對值為140.3±24.82,遠高于其他2組(P<0.05)(圖2-A)。RT-qPCR和Western blot檢測ZIKV NS5 RNA和NS1蛋白相對表達量:miR-133a-3p mimic組的相對值0.335 5±0.031(圖2-B),相對于其他2組被明顯抑制(P<0.01)(圖2-C)。2.3 miR-133a-3p過表達激活Jak/STAT信號通路經(jīng)

mimic control或miR-133a-3p mimic處理的A549細(xì)胞被ZIKV感染或polyⅠ∶C處理后,在24或48 h收集樣品,對IFNα/β)和2種ISGs(ISG15和IFIT1)做RT-qPCR檢測:miR-133a-3p的過表達增加了IFNα/β和ISGs的表達(圖3-A—H)。為了進一步核實miR-133a-3p對Jak/STAT信號通路的影響,將ISRE-luc/pRL-TK報告質(zhì)粒與miR-133a-3p mimic或mimic control共轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞24 h,用ZIKV或PolyⅠ∶C處理細(xì)胞48 h,以雙重?zé)晒馑孛笢y定法檢測:相對于mimic control組,高轉(zhuǎn)miR-133a-3p mimic使IRSE活性明顯增強(圖3-I)。鑒于ISRE作為ISGs啟動子元件啟動ISGs轉(zhuǎn)錄,足見 miR-133a-3p可以激活Jak/STAT信號通路。3 討論

【參考文獻】：
碩士論文
[1]豬細(xì)小病毒感染對PK-15細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄時相影響的研究[D]. 李厚偉.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：3074943