遺傳性出血性毛細血管擴張癥（Hereditary hemorrhagic telangiectasia,HHT）,也稱為郎-奧韋綜合征,是一種罕見的常染色體顯性遺傳病,主要表現(xiàn)為皮膚,粘膜和器官中的血管形成異常。HHT根據(jù)突變基因的不同主要分為5類,I型HHT的致病基因是Endoglin,約占該疾病50%。Endoglin是一類位于細胞表面的I型膜糖蛋白,同時也是TGF-β受體復合物的一部分。過去的研究證明了它在血管發(fā)育中發(fā)揮著至關重要的作用,但是Endoglin調(diào)控血管的具體機制以及下游的效應因子依舊缺乏認知。本研究結合斑馬魚動物模型、HHT病人樣本,探索Endoglin調(diào)控血管發(fā)育的機制以及下游效應基因。本研究課題采用的實驗方法包括,1.利用斑馬魚為體內(nèi)模型,顯微注射嗎啉基寡核苷酸（Morpholino,MO）抑制Endoglin的表達,通過實時熒光定量核酸擴增技術（Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR）、原位雜交（in situ hybridization）、流式細胞熒光分選技術（Fluorescence activated cell sortin... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的時空表達譜

階段的血管系統(tǒng)。７２小時ｅｒｔｇ－ＭＯ組（注射Ｅｎｄｏｇｌｉｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ的胚胎）中，??血管發(fā)育異常，一些ＩＳＶｓ出現(xiàn)破裂。在Ｅｎｄｏｇｌｉｎ過表達后能夠恢復Ｅｎｄｏｇｌｉｎ??ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ導致的缺陷ＩＳＶｓ?（圖３Ａ－Ｂ）。Ｆ／／７ａ是斑馬魚中眾所周知的內(nèi)皮細胞??標記物，ｙ７／７ｆｌ－ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例反映了血管細胞的數(shù)量［４７］。ＦＡＣＳ分析顯示，７２??小時ｅ？ｇ－ＭＯ組中ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例降低至３．４％，而７２小時的Ｃｏｎ－ＭＯ組中為??７．２％?（圖３Ｃ－Ｄ）。此外，Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的下游基因（／Ｊ／，?／必，？辦２）?［３９’４８］的表達在??ｅ？ｇ－ＭＯ組中降低（圖３Ｅ）。這些結果表明Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低會顯著地影響斑馬魚??胚胎的血管發(fā)育，其中ＩＳＶｓ的缺陷最嚴重。??Ａ?Ｃｏｎ－ＭＯ?ｅｎｇ－ＭＯ??ｅｎｇ?ｍＲＮＡ?ｅｎｇ－ＭＯ?＋?ｅｎｇ?ｍＲＮＡ??Ｂ?１００％??｜?■?■?■?■?Ｓ?＿??１?桃－■?＿?■?ＭＵｄ??■?■?Ｎｏｒｍａｌ??３１??

圖４：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低導致內(nèi)皮標志物表達的下降。Ａ：利用ＲＴ－ＰＣＲ檢測Ｃｏｎ－ＭＯ??和ｅｎｇ＇－ＭＯ組中內(nèi)皮標志物的表達，包括ｆｅ／ｒ／，ｃｏ％５，／７ｅｙ２，／ｗｏ２和／？ｗ．／。Ｇａｐｅ／／？??被用作內(nèi)參。Ｂ：使用Ｉｍａｇｅ?Ｊ進行灰度掃描分析Ａ圖中凝膠電泳的結果，實現(xiàn)??對于Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅｔｔｇ－ＭＯ組中不同內(nèi)皮標志物的ｍＲＮＡ表達水平的定量統(tǒng)計。??Ｃ：利用整體原位雜交檢測２４小時胚胎中Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅ？ｇ－ＭＯ組中內(nèi)皮標志物??的表達（每組ｎ＞?３０）。紅色箭頭表示內(nèi)皮標志物顯著減少的區(qū)域。比例尺為??２００ｐｍ。Ｄ：利用ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測Ｃｏｎ－ＭＯ和ｍｇ－Ｍｏ組的腦和軀干中內(nèi)皮標志??物的表達。（７叩辦被用作內(nèi)參（平均值土標準差，重復三次實驗）。??


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