遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥（Hereditary hemorrhagic telangiectasia,HHT）,也稱(chēng)為郎-奧韋綜合征,是一種罕見(jiàn)的常染色體顯性遺傳病,主要表現(xiàn)為皮膚,粘膜和器官中的血管形成異常。HHT根據(jù)突變基因的不同主要分為5類(lèi),I型HHT的致病基因是Endoglin,約占該疾病50%。Endoglin是一類(lèi)位于細(xì)胞表面的I型膜糖蛋白,同時(shí)也是TGF-β受體復(fù)合物的一部分。過(guò)去的研究證明了它在血管發(fā)育中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,但是Endoglin調(diào)控血管的具體機(jī)制以及下游的效應(yīng)因子依舊缺乏認(rèn)知。本研究結(jié)合斑馬魚(yú)動(dòng)物模型、HHT病人樣本,探索Endoglin調(diào)控血管發(fā)育的機(jī)制以及下游效應(yīng)基因。本研究課題采用的實(shí)驗(yàn)方法包括,1.利用斑馬魚(yú)為體內(nèi)模型,顯微注射嗎啉基寡核苷酸（Morpholino,MO）抑制Endoglin的表達(dá),通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)（Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR）、原位雜交（in situ hybridization）、流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)（Fluorescence activated cell sortin... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的時(shí)空表達(dá)譜

階段的血管系統(tǒng)。７２小時(shí)ｅｒｔｇ－ＭＯ組（注射Ｅｎｄｏｇｌｉｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ的胚胎）中，??血管發(fā)育異常，一些ＩＳＶｓ出現(xiàn)破裂。在Ｅｎｄｏｇｌｉｎ過(guò)表達(dá)后能夠恢復(fù)Ｅｎｄｏｇｌｉｎ??ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ導(dǎo)致的缺陷ＩＳＶｓ?（圖３Ａ－Ｂ）。Ｆ／／７ａ是斑馬魚(yú)中眾所周知的內(nèi)皮細(xì)胞??標(biāo)記物，ｙ７／７ｆｌ－ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例反映了血管細(xì)胞的數(shù)量［４７］。ＦＡＣＳ分析顯示，７２??小時(shí)ｅ？ｇ－ＭＯ組中ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例降低至３．４％，而７２小時(shí)的Ｃｏｎ－ＭＯ組中為??７．２％?（圖３Ｃ－Ｄ）。此外，Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的下游基因（／Ｊ／，?／必，？辦２）?［３９’４８］的表達(dá)在??ｅ？ｇ－ＭＯ組中降低（圖３Ｅ）。這些結(jié)果表明Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低會(huì)顯著地影響斑馬魚(yú)??胚胎的血管發(fā)育，其中ＩＳＶｓ的缺陷最嚴(yán)重。??Ａ?Ｃｏｎ－ＭＯ?ｅｎｇ－ＭＯ??ｅｎｇ?ｍＲＮＡ?ｅｎｇ－ＭＯ?＋?ｅｎｇ?ｍＲＮＡ??Ｂ?１００％??｜?■?■?■?■?Ｓ?＿??１?桃－■?＿?■?ＭＵｄ??■?■?Ｎｏｒｍａｌ??３１??

圖４：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低導(dǎo)致內(nèi)皮標(biāo)志物表達(dá)的下降。Ａ：利用ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)Ｃｏｎ－ＭＯ??和ｅｎｇ＇－ＭＯ組中內(nèi)皮標(biāo)志物的表達(dá)，包括ｆｅ／ｒ／，ｃｏ％５，／７ｅｙ２，／ｗｏ２和／？ｗ．／。Ｇａｐｅ／／？??被用作內(nèi)參。Ｂ：使用Ｉｍａｇｅ?Ｊ進(jìn)行灰度掃描分析Ａ圖中凝膠電泳的結(jié)果，實(shí)現(xiàn)??對(duì)于Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅｔｔｇ－ＭＯ組中不同內(nèi)皮標(biāo)志物的ｍＲＮＡ表達(dá)水平的定量統(tǒng)計(jì)。??Ｃ：利用整體原位雜交檢測(cè)２４小時(shí)胚胎中Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅ？ｇ－ＭＯ組中內(nèi)皮標(biāo)志物??的表達(dá)（每組ｎ＞?３０）。紅色箭頭表示內(nèi)皮標(biāo)志物顯著減少的區(qū)域。比例尺為??２００ｐｍ。Ｄ：利用ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)Ｃｏｎ－ＭＯ和ｍｇ－Ｍｏ組的腦和軀干中內(nèi)皮標(biāo)志??物的表達(dá)。（７叩辦被用作內(nèi)參（平均值土標(biāo)準(zhǔn)差，重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)）。??


本文編號(hào)：3074114