目的為進(jìn)一步研究慢阻肺相關(guān)機(jī)制及中醫(yī)證候,建立病證結(jié)合的慢阻肺氣虛證大鼠模型,探究慢阻肺氣虛證大鼠模型評價指標(biāo)。方法采用肺部滴入LPS合并煙熏和單純肺部滴入LPS兩種方法建立的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型為研究對象,采用病理、肺功能等進(jìn)行慢阻肺判定;通過宏觀表征采集、體重觀察、抓力測試、曠場實驗、ATP含量和線粒體動力學(xué)蛋白印跡檢測進(jìn)行大鼠證候判定。結(jié)果從第3周開始,LPS聯(lián)合煙熏組體重顯著小于空白組和LPS組（P <0.05）,持續(xù)至第12周;第8周時,LPS聯(lián)合煙熏組抓力最大值顯著小于空白組及LPS組（P <0.05）,三組之間抓力平均值無統(tǒng)計學(xué)差異;LPS聯(lián)合煙熏組曠場總距離和平均速率均顯著小于空白組和LPS組（P <0.05）;第12周結(jié)束時,LPS聯(lián)合煙熏組抓力最大值和平均值均顯著小于空白組和LPS組（P <0.05）;LPS聯(lián)合煙熏組曠場總距離和平均速率均顯著小于空白組和LPS組（P <0.05）;第12周結(jié)束時,ATP含量檢測結(jié)果顯示,LPS聯(lián)合煙熏組肺組織和骨骼肌中ATP含量較空白組有明顯的下降（P <0.05）;LPS聯(lián)合煙熏組骨骼肌A... 

【文章來源】：世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2020,22(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

肺組織中Drp1、Mfn1蛋白檢測結(jié)果

大鼠肺組織HE染色結(jié)果（×200)

本實驗通過肺功能檢測和病理結(jié)果可以判斷大鼠是否處于COPD，綜合宏觀表征、體重、抓力、曠場實驗可以判斷大鼠是否為氣虛證，從而確立COPD氣虛證大鼠模型。COPD存在多種造模方式，如宋一平[8]最早在國內(nèi)通過兩次氣管內(nèi)注入LPS(200μg/次）及熏香煙4周的復(fù)合刺激法建立大鼠COPD模型，解決了單純熏煙法難以復(fù)制出腺體增生肥大等重要病理表現(xiàn)的問題，但這種方法造模時間太短，對是否能成模存在很大的爭議。李紅梅[9]等使用熏煙加LPS和單純煙熏的方法，并將單純熏煙造模時間延長至3個月，結(jié)果發(fā)現(xiàn)煙熏聯(lián)合LPS組更符合COPD死亡患者尸檢病理改變，單純煙熏組雖有類似病理改變，但是其程度甚至低于煙熏聯(lián)合LPS 28天造模后大鼠的病理改變，可見單純煙熏不僅造模慢，而且效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如煙熏聯(lián)合LPS。劉君波[7]等通過氣管內(nèi)反復(fù)滴入LPS 8周建立大鼠COPD模型，之后方蘇榕[10]通過復(fù)制和比較90天香煙煙熏加氣管內(nèi)注入LPS、單獨香煙煙熏及單獨氣道內(nèi)注入LPS 3種方法，發(fā)現(xiàn)煙熏聯(lián)合氣管內(nèi)滴入LPS的方法更為符合人類COPD特征變化。另外，李建生等[11]采用肺炎克雷伯桿菌滴鼻的方法連續(xù)滴鼻16周后制備COPD急性加重期大鼠模型。文文等[12]采用銅綠假單胞菌反復(fù)感染大鼠氣道的方式可致大鼠產(chǎn)生COPD的病理學(xué)改變，以及蛋白水解酶誘導(dǎo)的COPD模型、基因調(diào)控COPD模型等[13]�？紤]到吸煙是導(dǎo)致人類COPD和其他呼吸系統(tǒng)疾病發(fā)生發(fā)展的最重要因素之一[14]，煙熏聯(lián)合LPS造模方法符合人類COPD病理變化，而單純LPS滴入誘導(dǎo)的COPD模型是在短時間內(nèi)造成肺及氣管的損傷，相較于LPS聯(lián)合煙熏制備的COPD大鼠模型，該模型可作為單純因素疾病模型，對于研究COPD大鼠證候變化和機(jī)制區(qū)別具有重要的對比意義；另外氣虛證多存在于COPD穩(wěn)定期，細(xì)菌感染型建立的動物模型多處于COPD急性加重期[15]。因此，本實驗中我們選擇單純滴入LPS和LPS滴入聯(lián)合煙熏兩種COPD疾病造模模型，動態(tài)觀察12周，研究COPD大鼠模型疾病發(fā)生發(fā)展及證侯變化，通過對比兩組大鼠第12周病理結(jié)果和肺功能發(fā)現(xiàn)兩種造模方法在第12周均可以建立COPD大鼠模型，LPS聯(lián)合煙熏組模型較LPS組更為典型�；诒菊n題組前期對血瘀證動物模型的研究經(jīng)驗[16-17]和臨床上COPD氣虛證的診斷標(biāo)準(zhǔn)和指標(biāo)，課題組制作了COPD氣虛證大鼠模型的等效指標(biāo)轉(zhuǎn)換表和宏觀表征采集表，并對COPD其它證型的判斷和鑒別制定了標(biāo)準(zhǔn)。在中醫(yī)理論中，慢阻肺氣虛證主要包括肺氣虛、肺脾氣虛和肺腎氣虛，課題組將三種證候的共同癥狀歸納為主癥和次癥，主癥包括神疲乏力、氣短懶言、喘息和動輒加重；次癥包括惡風(fēng)自汗、舌淡苔白或有齒痕，脈沉虛。通過實驗過程中對大鼠實際情況的觀察，將氣虛證共同癥狀等效轉(zhuǎn)換為呼吸頻率、呼吸幅度、自主活動、體重變化、抓取反抗、抓力測試、曠場實驗行進(jìn)總距離和平均速率等實際可觀察的指標(biāo)，滿足等效指標(biāo)三種及以上的情況，即認(rèn)為氣虛證成立，以判斷病證結(jié)合模型是否建立成功。通過對各組大鼠12周各項數(shù)據(jù)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)：LPS聯(lián)合煙熏組在第8周時，體重、曠場和抓力測試結(jié)果較空白組和LPS組都有明顯的氣虛證特征性改變；宏觀表征采集表結(jié)果顯示LPS聯(lián)合煙熏組大鼠不僅有活動量和體質(zhì)量增幅的減少，而且表現(xiàn)出蜷縮拱背、行動遲緩、神疲乏力、抓取反抗無力、毛失光澤、發(fā)黃、易脫落，偶可聞及呼吸道痰鳴音等表現(xiàn)，這些表現(xiàn)很大程度上符合中醫(yī)理論對于氣虛證的定義。到第12周時，這些癥狀更加明顯，結(jié)合肺功能和HE染色結(jié)果，我們可以判斷LPS聯(lián)合煙熏組的大鼠模型不僅有COPD的病理表現(xiàn)，而且兼具氣虛證的中醫(yī)證型表現(xiàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3065801