發(fā)布時間：2021-03-05 13:56

　　目的:本研究旨在通過密度梯度離心法、流式細(xì)胞術(shù)和體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法,探索小鼠肺組織內(nèi)造血干細(xì)胞（hematopoietic sterm cell,HSC）分離、純化與誘導(dǎo)分化為樹突狀細(xì)胞（dendriric cell,DC）的方法,為肺組織內(nèi)造血干細(xì)胞進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)并且為樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)分化提供一種新的實(shí)驗(yàn)路徑。方法:1、將24只C57健康雄性小鼠隨機(jī)分為6組,每組4只,肺組織來源的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,同時采集外周血,其來源的細(xì)胞為對照組。肺組織經(jīng)I型膠原酶和I型DNA酶消化制成單細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)組和對照組分別經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液,分離純化為肺單個核細(xì)胞。2、瑞氏吉姆薩染色后倒置相差顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)組和對照組單個核細(xì)胞的形態(tài)。3、流式細(xì)胞儀鑒定、分選Lin^-Sca-1⁺c-Kit⁺細(xì)胞（LSK）及造血干細(xì)胞。4、向所獲得的HSC加入SCF和IL-3促進(jìn)細(xì)胞增殖并計(jì)數(shù),停用SCF和IL-3后,加入粒GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)分化為DC,加入脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）促細(xì)胞成熟。5、倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)組單個核細(xì)胞，10×100

對照組單個核細(xì)胞，10×100

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.2 肺組織內(nèi)造血干細(xì)胞的鑒定、純化1 ml 小鼠外周血共收集單個核細(xì)胞 40115.40±1448.40 個、經(jīng)抗體標(biāo)記后,造血干細(xì)胞群(Lin–Sca-1+c-Kit+)的比例為 0±0(圖 2A 、B、C),小鼠外周血內(nèi)分離出造血干細(xì)胞；4 只小鼠肺組織共收集肺單個核細(xì)胞 35018.80±4533.71，經(jīng)抗體標(biāo)記后,造血干細(xì)胞(Lin–Sca-1+c-Kit+)的總量 2441.40±265.94 個，純度約 6.79%(圖 2D、E、F)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肺組織修復(fù)中肺內(nèi)外干細(xì)胞的作用、功能及問題[J]. 陳艷,劉弦.  中國組織工程研究. 2018(33)
[2]小鼠骨髓造血干細(xì)胞的分離純化及電鏡觀察[J]. 張小翠,谷浩,趙犇鵬,符蓉,于卓.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2018(04)
[3]小鼠造血干細(xì)胞表型及其分離純化的研究進(jìn)展[J]. 田晨,張翼鷟.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2012(01)
[4]小鼠肺間質(zhì)樹突狀細(xì)胞的分離、純化與鑒定[J]. 王宏偉,陸江陽,田光,劉茜,趙敏,楊毅,康佳蕊.  中國免疫學(xué)雜志. 2011(09)
[5]干細(xì)胞抗原-1（Sca-1）在干/祖細(xì)胞自我更新和分化中的作用研究[J]. 劉達(dá),陳平.  醫(yī)學(xué)信息(中旬刊). 2011(09)

碩士論文
[1]小鼠骨髓來源調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定[D]. 祁雪萍.山西醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3065316