目的:構(gòu)建人附睪蛋白（HE4）原核表達(dá)載體,獲得HE4蛋白并對(duì)其初步鑒定。方法:優(yōu)化合成含有兩個(gè)WAP結(jié)構(gòu)域的HE4基因序列并與載體pET32a（+）連接,構(gòu)建質(zhì)粒pET32-HE4,將其轉(zhuǎn)入BL21（DE3）菌中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)HE4蛋白。采用鎳離子親和層析法純化HE4蛋白,Western blot法和SDS-PAGE鑒定HE4蛋白。結(jié)果:合成的HE4基因序列產(chǎn)物大小288 bp,雙酶切鑒定及測(cè)序結(jié)果顯示成功構(gòu)建BL21-pET32-HE4表達(dá)菌,SDS-PAGE結(jié)果顯示該蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為30 000,符合預(yù)期。37℃條件下0.2 mmol/L IPTG誘導(dǎo)3 h時(shí)HE4蛋白表達(dá)量較大。純化獲得了HE4蛋白,經(jīng)Western blot鑒定有HE4抗原性。結(jié)論:成功制備了HE4蛋白。 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2020,55(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

陽(yáng)性克隆菌落PCR

pET32-HE4質(zhì)粒的EcoRⅠ和NotⅠ雙酶切

BL21- HE4蛋白的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 祁浩,劉新利.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(17)



本文編號(hào)：3051260