骨骼肌細胞也稱為骨骼肌肌纖維,由胚胎中胚層單核成肌前體細胞分化融合形成。骨骼肌損傷修復再生過程是肌衛(wèi)星細胞增殖分化為成肌細胞,后者融合形成新的肌纖維或者與受損肌纖維融合的過程。這些過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是成肌細胞融合。體外誘導哺乳動物成肌細胞融合以及動物肌肉損傷模型是研究成肌細胞融合的常用手段。本研究通過這兩種方法探究成肌細胞融合的機制,為提高成肌細胞的融合效率提供更多的理論依據(jù)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)PLD1在成肌細胞融合過程中被招募到細胞膜上并影響成肌細胞次級融合過程,但其作用機制并不十分明確。研究表明ARF6是PLD1的上游調(diào)節(jié)因子之一,在成肌細胞分化融合早期ARF6-GTP表達增加,然而ARF6在成肌細胞融合過程中發(fā)揮的作用并不明確,其激活PLD1在成肌細胞融合過程發(fā)揮的作用也不明確。因此我們將探究ARF6及其激活PLD1在成肌細胞融合過程中的作用,從而進一步揭示成肌細胞融合機制。目的:1.ARF6在成肌細胞融合過程中的作用。2.ARF6/PLD1在成肌細胞融合過程中的作用。方法:1.利用半定量PCR和實時熒光定量PCR（qP CR）檢測ARF6在骨骼肌損傷后修復及成肌細胞融合過程中的表達情... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

成肌細胞融合過程（From:Abmayretal.[21]

第 3 章 實驗結(jié)果3.1 成肌分化過程中 ARF6 的表達3.1.1 骨骼肌損傷后修復過程中 ARF6 的表達為了研究 ARF6 在骨骼肌損傷后修復過程中的作用，我們用心臟毒素（CTX）對小鼠腓腸肌造成損傷。如圖 3.1 A 所示，eMyh 在損傷后 d3-5 表達水平升高，表明CTX肌肉損傷模型建立成功[80]。ARF6表達水平在損傷d2時開始顯著升高，直至 d5 其表達水平和其在未損傷肌肉內(nèi)的表達水平相比都具有顯著差異（圖 3.1B）；并且單因素方差分析顯示損傷后不同時間點 ARF6 表達水平也有統(tǒng)計學差異。而此時間段與成肌干細胞分化修復受損肌纖維的時間段一致，提示 ARF6 可能在骨骼肌損傷后修復過程中發(fā)揮作用。

圖 3.2 成肌細胞分化過程中 ARF6 的表達變化圖 A、B：RT-PCR 檢測成肌細胞分化過程中 ARF6 表達。3.2 過表達 ARF6 激活型與非激活型對成肌細胞 L6 分化的影響3.2.1 過表達 ARF6-Q67L/WT-HAL6 成肌細胞的獲得與鑒定我們在 L6 成肌細胞中分別過表達 ARF6-Q67L-HA（ARF6 GTP 結(jié)合型，ARF6 處于持續(xù)激活狀態(tài)）和 ARF6-WT-HA（ARF6 野生型），通過 Geneticin（遺傳霉素）抗藥性篩選，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系 ARF6-Q67L-HAL6 和 ARF6-WT-HAL6。qPCR結(jié)果表明ARF6-Q67L-HAL6和ARF6-WT-HAL6兩種細胞系A(chǔ)RF6mARF6的表達水平顯著升高；Western blot 結(jié)果顯示兩種細胞細胞系分別表達 ARF6-Q67L-HA、ARF6-WT-HA 蛋白（圖 3.3A,B）。圖 3.3C 是 ARF6-Q67L-HAL6 和ARF6-WT-HA L6 的細胞形態(tài)，可以看到其細胞形態(tài)并未發(fā)生明顯的改變，依然


本文編號：3050127