銅綠假單胞菌是一種具有很強(qiáng)環(huán)境適應(yīng)性的機(jī)會(huì)致病菌,感染后通常很難治愈從而造成很?chē)?yán)重的后果.聚胺類(lèi)化學(xué)物質(zhì)在很多種生物體內(nèi)廣泛存在,并且在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮多種重要的功能.銅綠假單胞菌PAO1可以利用聚胺類(lèi)物質(zhì)作為菌體生長(zhǎng)所需的唯一的碳源和氮源,亞精胺脫氫酶（SpdH）在銅綠假單胞菌亞精胺代謝過(guò)程中發(fā)揮重要的作用.本研究在大腸桿菌中成功表達(dá)了可溶性SpdH蛋白,并經(jīng)過(guò)多種方法純化后篩選獲得了蛋白質(zhì)晶體,通過(guò)X射線衍射實(shí)驗(yàn)收集到分辨率達(dá)到0.185 nm的衍射數(shù)據(jù),并使用HKL2000軟件對(duì)衍射數(shù)據(jù)進(jìn)行了處理,這些數(shù)據(jù)為SpdH結(jié)構(gòu)的解析奠定了基礎(chǔ). 

【文章來(lái)源】：南開(kāi)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,53(03)北大核心

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【部分圖文】：

SpdH蛋白的晶體

去除GST標(biāo)簽后的SpdH使用陰離子交換柱HiTrap Q及凝膠過(guò)濾層析柱Superdex200 10/300GL進(jìn)行純化,圖2為陰離子交換柱的出峰情況,圖3為凝膠過(guò)濾層析柱的出峰情況,從這兩幅圖可以看出:目的蛋白出峰單一,帶電荷狀況和分子量狀況都很均一.圖4為陰離子交換柱和凝膠過(guò)濾層析柱取樣SDS-PAGE情況:經(jīng)過(guò)兩步純化之后,SpdH的純度得到了提升,尤其是凝膠過(guò)濾層析之后的樣品中雜質(zhì)蛋白幾乎不可見(jiàn).圖1 SpdH親和層析SDS-PAGE結(jié)果

SpdH親和層析SDS-PAGE結(jié)果


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