目的建立皮內(nèi)注射用卡介苗（Bacillus Calmette Guerin vaccine,BCG）特異性鑒別試驗(yàn)的多重PCR法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法根據(jù)GenBank登錄的Pasteur 1173P2株序列（AM408590. 1）設(shè)計(jì)并合成引物,以制備的BCG特異性鑒別試驗(yàn)國(guó)家參考品（簡(jiǎn)稱(chēng)BCG鑒別參考品）DNA為模板,多重PCR法擴(kuò)增其特異性缺失區(qū)RD1,產(chǎn)物經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,驗(yàn)證方法的重復(fù)性、中間精密度、特異性、耐用性及靈敏度;采用該方法檢測(cè)8批皮內(nèi)注射用BCG供試品。結(jié)果 BCG鑒別參考品在重復(fù)檢測(cè)6次、2名檢測(cè)人員分別重復(fù)檢測(cè)3 d、不同PCR退火溫度及不同DNA聚合酶加量時(shí)均擴(kuò)增出約200 bp的核酸片段;最低可檢10 pg/mL的目的基因,僅對(duì)結(jié)核分枝桿菌H37Rv及皮內(nèi)注射用BCG樣品DNA擴(kuò)增出特異性條帶。經(jīng)該方法檢測(cè),8批供試品PCR產(chǎn)物電泳均可見(jiàn)單一的目的條帶,無(wú)RD1序列存在,大小與BCG鑒別參考品一致。結(jié)論多重PCR法的重復(fù)性、中間精密度、特異性、耐用性及靈敏度良好,可應(yīng)用于皮內(nèi)注射用BCG特異性鑒別試驗(yàn)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2020,33(02)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

BCG鑒別參考品中間精密度驗(yàn)證PCR產(chǎn)物電泳圖

PCR方法的特異性驗(yàn)證電泳圖

PCR不同退火溫度BCG鑒別參考品PCR產(chǎn)物電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]卡介苗生產(chǎn)用菌株的遺傳穩(wěn)定性研究[J]. 程鵬飛,劉朝陽(yáng),陳艷紅,徐帆洪,馬相虎.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2013(10)
[2]國(guó)內(nèi)外卡介菌的分子遺傳學(xué)特性[J]. 趙愛(ài)華,賈淑珍,寇麗杰,喬來(lái)艷,王國(guó)治.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2009(06)



本文編號(hào)：2982522