盤尾絲蟲是一種人寄生蟲,游走到眼部會(huì)導(dǎo)致不同程度的失明,因此盤尾絲蟲病也叫河盲癥。盤尾絲蟲的傳播需要中間宿主蚋蚊的參與,當(dāng)被感染的蚋蚊吸食人血時(shí),3齡的盤尾絲蟲幼蟲會(huì)隨之進(jìn)入人體。目前治療盤尾絲蟲病的主要藥物是伊維菌素,能夠殺死成蟲。該藥物原被用于獸用驅(qū)蟲藥,在經(jīng)過(guò)數(shù)十年的使用后,近年來(lái)也漸漸有出現(xiàn)抗藥性的報(bào)道。盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1是高度時(shí)期特異性的酶,只在侵染期L3幼蟲中表達(dá),與幼蟲蛻皮過(guò)程有關(guān)。因此OvCht1在盤尾絲蟲的生活史,尤其是在對(duì)宿主的侵染過(guò)程中,起著至關(guān)重要的作用,可作為新的殺蟲靶標(biāo)。本文通過(guò)構(gòu)建重組表達(dá)載體獲得OvCht1,篩選實(shí)驗(yàn)室化合物庫(kù)發(fā)現(xiàn)抑制OvCht1的化合物,以發(fā)現(xiàn)新的抑制劑骨架結(jié)構(gòu),并對(duì)抑制劑的作用機(jī)理進(jìn)行研究。本論文包括以下研究?jī)?nèi)容:（1）構(gòu)建大腸桿菌重組表達(dá)載體,以獲得全長(zhǎng)OvCht1。首先對(duì)OvCht1序列進(jìn)行分析,OvCHT編碼497個(gè)氨基酸,不存在跨膜區(qū)域。構(gòu)建pET22b-OvCht1L-C及pET28a-OvCht1（L-N、S-N、L-C、S-C）表達(dá)載體,利用金屬螯合層析對(duì)目的蛋白進(jìn)行分離純化,使用SDS-PAGE觀察目的蛋白分... 

【文章來(lái)源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 線蟲
        1.1.1 線蟲的分布與分類
        1.1.2 盤尾絲蟲
        1.1.3 盤尾絲蟲病
    1.2 線蟲幾丁質(zhì)酶
        1.2.1 幾丁質(zhì)酶
        1.2.2 線蟲幾丁質(zhì)酶
        1.2.3 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶
    1.3 線蟲幾丁質(zhì)酶抑制劑
        1.3.1 GH18幾丁質(zhì)酶抑制劑
        1.3.2 線蟲幾丁質(zhì)酶抑制劑
        1.3.3 研究線蟲幾丁質(zhì)酶抑制劑的意義
    1.4 本論文的選題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 選題依據(jù)
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
2 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1的序列分析與重組表達(dá)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1序列分析
        2.2.3 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1進(jìn)化分析
        2.2.4 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1重組表達(dá)
        2.2.5 OvCht1的定量及純度分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1序列分析
        2.3.2 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1進(jìn)化分析
        2.3.3 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1重組表達(dá)
    2.4 小結(jié)
3 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1的抑制劑篩選
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 化合物初篩
        3.2.3 化合物復(fù)篩
        3.2.4 Ki值測(cè)定
        3.2.5 化合物選擇性測(cè)定
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 化合物初篩
        3.3.2 化合物復(fù)篩
        3.3.3 Ki值測(cè)定
        3.3.4 化合物選擇性測(cè)定
    3.4 小結(jié)
4 盤尾絲蟲幾丁質(zhì)酶OvCht1抑制劑的抑制機(jī)理
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 同源模建
        4.2.2 化合物2-8衍生物與Ovcht1對(duì)接
        4.2.3 化合物2-8與hCht和CeT1對(duì)接
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 同源模建
        4.3.2 不同2-8衍生物與Ovcht1結(jié)合方式比較
        4.3.3 不同幾丁質(zhì)酶與化合物2-8結(jié)合方式比較
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]昆蟲幾丁質(zhì)酶的分類、功能分析、重組表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)的研究進(jìn)展[J]. 任慧,張常,范曉軍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2014(04)
[2]分子對(duì)接方法的應(yīng)用與發(fā)展[J]. 段愛霞,陳晶,劉宏德,劉秀輝,盧小泉.  分析科學(xué)學(xué)報(bào). 2009(04)

碩士論文
[1]亞洲玉米螟幾丁質(zhì)水解酶的克隆表達(dá)與生化性質(zhì)表征[D]. 吳青悅.大連理工大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2982714