目的確定肺炎鏈球菌β-內(nèi)酰胺抗生素耐藥相關(guān)胞內(nèi)應(yīng)答調(diào)節(jié)蛋白CiaR能與跨膜絲氨酸/蘇氨酸激酶StkP結(jié)合組成StkP/CiaR二元信號傳導(dǎo)系統(tǒng)（TCSS）。方法采用PCR擴(kuò)增stkP基因胞內(nèi)區(qū)片段（IC-stkP）,T-A克隆測序確認(rèn)序列正確后構(gòu)建其原核表達(dá)系統(tǒng)。SDS-PAGE檢查IC-stkP片段和我們以往構(gòu)建的ciaR基因原核表達(dá)系統(tǒng)目的重組蛋白rIC-StkP和rCiaR表達(dá)情況,Ni-NTA親和層析法提純rIC-StkP和rCiaR。采用Co-IP和LC-MS/MS鑒定rIC-StkP捕獲的肺炎鏈球菌靶蛋白。采用等離子共振法（SPR）和等溫滴定量熱法（ITC）檢測rCiaR與rIC-StkP結(jié)合能力。結(jié)果所構(gòu)建的IC-stkP片段原核表達(dá)系統(tǒng)能有效表達(dá)rIC-StkP。SDS-PAGE結(jié)果顯示提純的rIC-StkP和rCiaR在膠上均為單一蛋白質(zhì)條帶。CiaR可與rIC-StkP特異性共沉淀,其3個裂解肽位于CiaR分子內(nèi)且序列完全相符。SPR和ITC結(jié)果顯示,rCiaR與rIC-StkP呈高親和力強(qiáng)結(jié)合,其KD值分別為1.526×10-9 mol/L和1.980×10-6 ... 

【文章來源】：中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2020,40(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]肺炎鏈球菌CiaR調(diào)控pbps和csRNAs基因表達(dá)作用及其與耐藥相關(guān)性[J]. 張新蔚,黃燕穎,樓永良,嚴(yán)杰,孫愛華.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2017 (01)
[3]肺炎鏈球菌ciaH基因與β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的相關(guān)性研究[J]. 張少妮,孫顏紅,樓永良,嚴(yán)杰,孫愛華.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2015 (09)
[4]肺炎鏈球菌phpP基因重組表達(dá)及其產(chǎn)物PP2C型磷酸酶活性的研究[J]. 孫顏紅,張少妮,樓永良,嚴(yán)杰,孫愛華.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2014 (11)
[5]肺炎鏈球菌ciaH/R基因重組表達(dá)及CiaH/R與β-內(nèi)酰胺類耐藥相關(guān)性[J]. 孫愛華,樊歡,夏肖萍,李向陽,嚴(yán)杰.  浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2008(06)



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