目的原核表達(dá)結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuber-culosis,MTB）ESAT6-CFP10融合蛋白（recombinant ESAT6-CFP10,rEC）,并優(yōu)化表達(dá)條件。方法以（GGGGS）3為linker將ESAT6和CFP10兩個(gè)基因連接,合成rEC全基因,插入至載體pET-28a,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-rEC,轉(zhuǎn)化至感受態(tài)E. coli BL21（DE3）,篩選優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并對(duì)誘導(dǎo)溫度（25、30、37℃）、誘導(dǎo)劑種類及濃度（0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0 mmol/L IPTG及0. 5、1、5、10、15、20 g/L乳糖）、誘導(dǎo)時(shí)間（2、3、4、5、6 h）、誘導(dǎo)起始A600（0. 4、0. 6、0. 8、1. 0）進(jìn)行優(yōu)化。菌種經(jīng)5 L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)后,采用親和層析及離子交換層析純化rEC融合蛋白,于-20℃分別儲(chǔ)存0、2、4、6個(gè)月,12. 5%SDS-PAGE分析rEC融合蛋白,并對(duì)保存0、6月的樣品進(jìn)行HPLC-SEC分析。結(jié)果重組質(zhì)粒pET-28a-rEC經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,構(gòu)建正確。rEC融合蛋白最適... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020年03期

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET-28a-r EC的雙酶切（ApaⅠ/XhoⅠ）鑒定

表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE分析

2 HPLC純度檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2950832