目的本研究目的是利用實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型(多發(fā)性硬化癥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型),闡明在多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis,MS)發(fā)病過程中,Klotho對(duì)Th17細(xì)胞分化的作用。方法將8~10周的C57BL/6小鼠平均分成三組:EAE組(實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型組),EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組。造模第30天處死小鼠后,用FACS檢測輔助性T細(xì)胞(Th);ELISA方法檢測分化相關(guān)細(xì)胞因子(IL-6、IL-23、IL-10、IL-4等);蛋白免疫印跡法(western blot)用來檢測Th17相關(guān)調(diào)節(jié)因子及轉(zhuǎn)錄因子(PI3K、NF-κB、RORγT);免疫熒光染色用來檢測蛋白分布及共定位(KL、IL-17和CD68)。結(jié)果比較不同濃度EAE+KL組和EAE組發(fā)病時(shí)間和臨床評(píng)分發(fā)現(xiàn),兩個(gè)EAE+KL組發(fā)病時(shí)間較EAE組明顯延遲,臨床評(píng)分明顯降低。比較兩種濃度EAE+KL組之間發(fā)病時(shí)間、臨床評(píng)分沒有明顯差別。FACS檢測Th細(xì)胞分化情況,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,EAE+KL組較EAE組由Th1分泌的IFN-γ、Th17分泌的IL-17表達(dá)量明顯降低。脾細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,EAE+KL組較EAE組由Th1分泌的IFN-γ、Th17分泌的IL-17表達(dá)量明顯降低,由Treg分泌的Foxp3表達(dá)量增高。ELISA方法檢測分化相關(guān)細(xì)胞因子顯示,EAE+KL組炎癥因子(IL-23、IL-6、IL-17及IFN-γ)較EAE組明顯降低,IL-10和IL-4明顯升高。蛋白免疫印跡顯示,EAE+KL組PI3K、NF-κB和RORγT較EAE組明顯降低。雙重免疫熒光染色顯示,EAE+KL組較EAE組IL-17單陽性細(xì)胞數(shù)減少,KL單陽性細(xì)胞數(shù)增多,兩組雙陽性細(xì)胞數(shù)沒有差別。EAE+KL組較EAE組CD68單陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少,KL單陽性細(xì)胞數(shù)、CD68和KL雙陽性細(xì)胞數(shù)增多。結(jié)論在脾臟,KL通過調(diào)控PI3K/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)而對(duì)Th17細(xì)胞的分化起到一定的抑制作用,KL也可以調(diào)控巨噬細(xì)胞的活性從而在一定程度上抑制Th0向Th17細(xì)胞的分化輔助作用。此結(jié)論可為多發(fā)性硬化癥的研究提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R744.51;R-332
【部分圖文】：

EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組最高臨床評(píng)分較EAE組明顯降低，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；EAE+KL(H)組最高臨床評(píng)分較EAE+KL(L)組也降低，P<0.05（圖1-2所示）。圖1 小鼠EAE動(dòng)物模型發(fā)病的臨床評(píng)分(*P<0.05)

18a b圖2 小鼠發(fā)病時(shí)間和臨床評(píng)分比較注：圖a為各組小鼠開始發(fā)病時(shí)間，EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組（*P<0.05）。圖b為各組小鼠最高臨床評(píng)分EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組（*P<0.05）。（二）EAE 小鼠的健康率分析為分析小鼠臨床發(fā)病率情況，我們繪制了各組小鼠健康率的折線圖（圖3），以反映小鼠的發(fā)病情況：我們發(fā)現(xiàn)，EAE組從免疫當(dāng)天（0天）到免疫第6天，發(fā)病率為0，從第7天開始，發(fā)病率逐漸上升，到第11天發(fā)病率為100%。即EAE組所有小鼠均發(fā)病。EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組從免疫當(dāng)天（0天）到第10天左右發(fā)病率都為0

小鼠最高臨床評(píng)分EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組（*P<0.05）。（二）EAE 小鼠的健康率分析為分析小鼠臨床發(fā)病率情況，我們繪制了各組小鼠健康率的折線圖（圖3），以反映小鼠的發(fā)病情況：我們發(fā)現(xiàn)，EAE組從免疫當(dāng)天（0天）到免疫第6天，發(fā)病率為0，從第7天開始，發(fā)病率逐漸上升，到第11天發(fā)病率為100%。即EAE組所有小鼠均發(fā)病。EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組從免疫當(dāng)天（0天）到第10天左右發(fā)病率都為0，即開始發(fā)病時(shí)間大體相同，隨時(shí)間推移，發(fā)病率上升，EAE+KL(L)組和EAE+KL(H)組約到第13天發(fā)病率為100%，即全部發(fā)病。圖3 各組小鼠健康率的分析注： EAE組小鼠從第7天開始發(fā)病
【參考文獻(xiàn)】

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1 何永利;王詠龍;蔡志友;晏勇;;BACE1與β-淀粉樣蛋白在快速老化大鼠腦組織中的表達(dá)及行為學(xué)相關(guān)性研究[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年01期

本文編號(hào)：2873621