目的在已報(bào)導(dǎo)的原代小腦顆粒細(xì)胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培養(yǎng)方法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn),以獲得較少雜質(zhì)、更高存活率及更高純度的CGNs,為后續(xù)體外研究做準(zhǔn)備。方法將Tryple Express消化液消化及前后兩次離心后得到的單細(xì)胞懸液,經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)后接種在預(yù)先用多聚賴氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培養(yǎng)板中。接種20～24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及從d 4開(kāi)始每隔3天加入終濃度5 mmol·L-1的Glucose。借助熒光顯微鏡及神經(jīng)元特異性標(biāo)志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)對(duì)CGNs細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察及純度鑒定。結(jié)果與原有的胰酶提取方法相比,改進(jìn)后的CGNs提取方法細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、突觸發(fā)育完善、細(xì)胞碎片等雜質(zhì)含量較少,并具有較高存活率及純度(97%)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便可行,結(jié)果穩(wěn)定,可以為體外神經(jīng)元的生長(zhǎng)發(fā)育、軸突再生和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究提供有力支持。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)板的包被
        1.2.2 培養(yǎng)操作液的配制
        1.2.3 小腦顆粒神經(jīng)元的提取及原代培養(yǎng)方法
        1.2.4 細(xì)胞存活率計(jì)數(shù)
        1.2.5 CGNs的形態(tài)學(xué)觀察
        1.2.6 CGNs的免疫組織化學(xué)鑒定
        1.2.7 星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)觀察
        1.2.8 統(tǒng)計(jì)方法
2 結(jié)果
    2.1 CGNs的細(xì)胞存活率
    2.2 CGNs提取方法改進(jìn)前后收獲的單細(xì)胞數(shù)量比較
    2.3 CGNs神經(jīng)元生長(zhǎng)形態(tài)變化
    2.4 CGNs的純度鑒定
3 討論

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