目的:本研究通過(guò)建立機(jī)械性眼外傷動(dòng)物模型,評(píng)價(jià)玻璃體腔注射雷珠單抗和康柏西普對(duì)VEGF、PDGF、TGF-β和PAI-1的影響及其安全性,并分析其相關(guān)機(jī)制。方法:(1)取體重2-2.5KG,3-6月齡健康比利時(shí)兔95只隨機(jī)分組,分為正常組(n=5)、開(kāi)放性眼外傷(Open-globe Injury,OGI)組(n=15)、閉合性眼外傷(Closed-globe Injury,CGI)組(n=15)、開(kāi)放性眼外傷雷珠單抗注射組(n=15)、開(kāi)放性眼外傷康柏西普注射組(n=15)、閉合眼外傷雷珠單抗注射組(n=15)和閉合性眼外傷康柏西普注射組(n=15)。開(kāi)放性眼外傷模型制作方法為用無(wú)菌15度穿刺刀于兔右眼顳上方角鞏膜緣后6.0 mm刺入眼球內(nèi)部,并沿該穿刺口平行角鞏膜緣用眼科剪延長(zhǎng)球壁切口至5.0 mm,0.5h后按照無(wú)菌原則縫合傷口,縫合后抗生素滴眼。閉合性眼外傷模型制作方法為應(yīng)用液壓顱腦損傷儀(Fluid percussion injury,FPI),設(shè)置打擊錘角度為65°,正面擊打于兔右眼角膜中心1次,傷后抗生素滴眼。(2)開(kāi)放性眼外傷組和閉合性眼外傷組分別在外傷后7d、10d、14d抽取玻璃體0.1mL。外傷后藥物注射組在外傷后0.5h、3d或7d玻璃體腔注射雷珠單抗0.25mg或康柏西普0.25mg,注藥后7d抽取玻璃體0.1mL。(3)酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測(cè)各組玻璃體內(nèi)VEGF、PDGF、TGF-β、PAI-1因子濃度。所有兔在外傷后28d處死用于做相關(guān)實(shí)驗(yàn),采用HE染色觀察各組兔視網(wǎng)膜的組織病理學(xué)改變,采用免疫熒光染色檢測(cè)GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞和Müller細(xì)胞顯示視網(wǎng)膜增生情況。結(jié)果:(1)開(kāi)放性眼外傷后注射雷珠單抗可顯著降低玻璃體內(nèi)PAI-1、VEGF、PDGF的濃度,在OGI后0.5h、3d或7d注射雷珠單抗,7d后其玻璃體內(nèi)細(xì)胞因子濃度分別為:PAI-1:3.25±1.9 9 ng/ml、2.70±2.02 ng/ml、23.60±17.52 ng/ml;VEGF:9.47±20.95 pg/ml、22.77±9.98 pg/ml、16.12±18.58 pg/ml;PDGF:9.91±9.29pg/ml、3.97±6.26 pg/ml、12.09±16.78 pg/ml(P0.05)。TGF-β僅在外傷后在7d注射雷珠單抗顯著降低,7d后其玻璃體內(nèi)濃度為26.13±3.99 pg/ml(P0.05)。開(kāi)放性眼外傷后注射康柏西普同樣均可顯著降低玻璃體內(nèi)PAI-1、VEGF、PDGF的濃度,在OGI后0.5h、3d或7d注射康柏西普,7d后其玻璃體內(nèi)細(xì)胞因子濃度分別為:PAI-1:6.13±4.34 ng/ml、2.19±0.58 ng/ml、3.76±1.079 ng/ml;VEGF:34.47±25.96 pg/ml、30.21±14.51 pg/ml、15.85±11.14 pg/ml;PDGF:8.97±11.76 pg/ml、6.63±8.17 pg/ml、8.97±8.12 pg/ml(P0.05)。TGF-β僅在OGI后7d注射康柏西普降低,7d后其玻璃體內(nèi)濃度為246.76±56.38 pg/ml(P0.05),0.5h和3d注射康柏西普不能降低TGF-β的濃度。OGI后0.5h、3d或7d注射雷珠單抗或康柏西普,VEGF和PDGF濃度無(wú)顯著差異;OGI后早期注射康柏西普可使PAI降低程度更大(3d注射vs.7d注射,P0.05);OGI后7d注射雷珠單抗較注射康柏西普更能顯著降低TGF-β(P0.05)。(2)閉合性眼外傷后注射雷珠單抗可明顯降低玻璃體內(nèi)PAI-1、VEGF和PDGF的濃度,在CGI后0.5h、3d或7d注射雷珠單抗,7d后其玻璃體內(nèi)細(xì)胞因子濃度分別為:PAI-1:15.76±10.17 ng/ml、11.3±5.46 ng/ml、4.98±4.76 ng/ml;VEGF:-0.76±10.12 pg/ml、-8.39±38.06 pg/ml、5.59±6.44 pg/ml;PDGF:-7.78±3.22 pg/ml、-7.61±6.42 pg/ml、-10.25±0.89 pg/ml(P0.05)。閉合性眼外傷后注射康柏西普也可明顯降低玻璃體內(nèi)PAI-1、VEGF和PDGF的濃度,在CGI后0.5h、3d或7d注射康柏西普,7d后其玻璃體內(nèi)細(xì)胞因子濃度分別為:PAI-1:1.91±1.28 ng/ml、8.36±6.7 ng/ml、7.06±10.73 ng/ml;VEGF:-15.17±38.2 pg/ml、10.89±10.48 pg/ml、5.59±12.25 pg/ml;PDGF:-8.84±2.53 pg/ml、5.77±32.68 pg/ml、-3.38±4.93 pg/ml(P0.05)。CGI后0.5h、3d或7d注射雷珠單抗或康柏西普,VEGF和TGF-β濃度無(wú)顯著差異;CGI后0.5h注射康柏西普較注射雷珠單抗更能顯著降低PAI(P0.05);CGI后7d注射雷珠單抗比注射康柏西普更能顯著降低PDGF(P0.05);CGI后注射雷珠單抗或康柏西普不能降低TGF-β濃度。(3)HE染色顯示開(kāi)放性眼外傷組視網(wǎng)膜組織厚度變厚,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層疏松,各層結(jié)構(gòu)排列紊亂;閉合性眼外傷組視網(wǎng)膜厚度減少,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層變薄,視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)不清。開(kāi)放性眼外傷后0.5h注射雷珠單抗組或康柏西普視網(wǎng)膜各層均趨于正常,細(xì)胞排列較規(guī)則,視網(wǎng)膜纖維增殖減少;閉合性眼外傷后0.5h注射雷珠單抗或康柏西普視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)均趨于正常,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列較規(guī)則。(4)B超結(jié)果顯示開(kāi)放性眼外傷4W后視網(wǎng)膜傷口部位有局限性強(qiáng)回聲;開(kāi)放性眼外傷后玻璃體腔注射雷珠單抗或康柏西普4W后玻璃體腔內(nèi)未見(jiàn)強(qiáng)回聲。結(jié)合眼球解剖可見(jiàn)開(kāi)放性眼外傷后注射雷珠單抗或康柏西普可抑制傷口處視網(wǎng)膜增殖膜形成。(5)免疫熒光顯示開(kāi)放性眼外傷后視網(wǎng)膜中GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞和Müller細(xì)胞增生,軸突增長(zhǎng),表現(xiàn)在全視網(wǎng)膜層,注射雷珠單抗后其表達(dá)減少。結(jié)論:(1)機(jī)械性眼外傷后眼內(nèi)注射雷珠單抗或康柏西普,有抑制視網(wǎng)膜增殖的趨勢(shì)。(2)開(kāi)放性眼外傷早期玻璃體腔注射雷珠單抗或康柏西普可預(yù)防增生病變,閉合性眼外傷玻璃體腔注射雷珠單抗或康柏西普有增加病變風(fēng)險(xiǎn),需進(jìn)一步研究和探討機(jī)制。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R779.1;R-332
【部分圖文】：

圖 7.A：空白組視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列緊密，形態(tài)完整。B：與空白組相比（圖 7.A），開(kāi)放性眼外傷組視網(wǎng)膜組織厚度變厚，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層疏松，各層結(jié)構(gòu)排列紊亂，細(xì)胞排列疏松；C：與開(kāi)放性眼外傷組相比（圖 7.B），開(kāi)放性眼外傷后 0.5h 注射雷珠單抗組視網(wǎng)膜各層趨于正常，細(xì)胞排列較規(guī)則，視網(wǎng)膜纖維增殖減少；D：開(kāi)放性眼外傷后 0.5h 注射康柏西普組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)同樣趨于正常，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞從排列相對(duì)規(guī)則，視網(wǎng)膜纖維增殖減少；E：空白組視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列緊密，形態(tài)完整；F：閉合性眼外傷組可見(jiàn)視網(wǎng)膜厚度減少，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層變薄，視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞排列紊亂。G：與閉合性眼外傷組相比，閉合性眼外傷后 0.5h 注射雷珠單抗后視網(wǎng)膜組織增厚，結(jié)構(gòu)趨于正常，細(xì)胞排列相對(duì)規(guī)則；H：閉合性眼外傷后 0.5h 注射康柏西普視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)趨于正常，細(xì)胞排列較規(guī)則。（×200，n=3，比例尺為 50 μm）2.4 開(kāi)放性眼外傷后視網(wǎng)膜增生情況變化兔眼球 B 超結(jié)果如圖 8.所示，空白對(duì)照組視網(wǎng)膜平伏在位，玻璃體清（圖8A）；開(kāi)放性眼外傷 4W 后傷口部位視網(wǎng)膜局限性強(qiáng)回聲（見(jiàn)箭頭所示），玻璃

圖 8. 兔眼球 B 超如圖 A-D 所示；A：空白對(duì)照組 B 超示視網(wǎng)膜平伏在位，玻璃體清；B：開(kāi)放性眼外傷 4W 后傷口部位視網(wǎng)膜局限性強(qiáng)回聲（見(jiàn)箭頭所示），玻璃體混濁；C:開(kāi)放性眼外傷后玻璃體腔注射雷珠單抗 4W 后玻璃體腔內(nèi)高回聲消失，玻璃體清; D: 開(kāi)放性眼外傷后玻璃體腔注射雷珠單抗 4W 后玻璃體腔內(nèi)高回聲消失，玻璃體清。 兔眼球解剖結(jié)果如圖 E-H 所示；E: 開(kāi)放性眼外傷后 4W眼球解剖可見(jiàn)空白對(duì)照組視網(wǎng)膜無(wú)增殖，玻璃體清；F：開(kāi)放性眼外傷后傷口處視網(wǎng)膜增殖明顯（ 示傷口部位，示增殖膜），玻璃體腔混濁；G：開(kāi)放性眼外傷后注射雷珠單抗后可見(jiàn)傷口處視網(wǎng)膜增殖減低，玻璃體相對(duì)較清；H：開(kāi)放性眼外傷后注射康柏西普后可見(jiàn)傷口處視網(wǎng)膜增殖減少，玻璃體相對(duì)較清。2.5 開(kāi)放性眼外傷后視網(wǎng)膜 GFAP 的變化視網(wǎng)膜免疫熒光染色結(jié)果如圖 9 所示（×200，n=3），空白對(duì)照組兔視網(wǎng)膜核層排列整齊，GFAP 陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞和 Muller 細(xì)胞弱表達(dá)，主要分布在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層和外核層（圖 9A-C）；開(kāi)放性眼外傷組兔視網(wǎng)膜核層排列尚可，視網(wǎng)膜中 GFAP 陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)

19圖 8. 兔視網(wǎng)膜切片 GFAP 陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。Control 組：空白對(duì)照組，核層排列整齊，GFAP 陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞主要在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層和外核層；OGI 組：開(kāi)放傷組顯示視網(wǎng)膜核層尚可，GFAP 表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞和 Müller 細(xì)胞胞體增多，軸突增長(zhǎng)，表現(xiàn)在全視網(wǎng)膜層；OGI 后注射雷珠單抗組：該組視網(wǎng)膜核層排列相對(duì)整齊，GFAP 表達(dá)較外傷組明顯減少。（GCL，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；IPL，內(nèi)叢狀層；INL，內(nèi)核層；OPL，外叢狀層；ONL，外核層； IS / OS，感光細(xì)胞層的內(nèi)段/外段；×200，n=3，比例尺為 50 μm）3 討論機(jī)械性眼外傷是導(dǎo)致視力下降或失明的主要原因之一，它不僅造成眼球結(jié)構(gòu)的損傷，還可發(fā)生一些嚴(yán)重的并發(fā)癥。外傷性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變
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本文編號(hào)：2865027