獼猴(macaca mulatta)是與人類更接近的動物物種,通常用作評估疫苗,同時也可以用于克隆與人源抗體高度相同的單克隆抗體。漿母細(xì)胞在人體中定義明確且易于分離,但仍不清楚是否可以將人的漿母細(xì)胞表型標(biāo)記用于分離中國獼猴的漿母細(xì)胞。在本研究中,我們評估了一系列細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記,并將中國獼猴漿母細(xì)胞的表型鑒定為CD3-CD14-CD56-CD19-CD27-CD20-/lowCD80+HLA-DR+CD95+。中國獼猴在接種流感病毒疫苗后,外周血單核細(xì)胞(PBMC)中的漿母細(xì)胞瞬時增加,在加強(qiáng)免疫接種后第4-7天達(dá)到高峰,并在第14天恢復(fù)到檢測不到的水平�？乖禺愋訣lispot檢測證實了分泌的流感特異性抗體來自這些漿母細(xì)胞。中國獼猴漿母細(xì)胞與人類漿母細(xì)胞相比,二者具有類似的轉(zhuǎn)錄特征。使用免疫球蛋白重鏈和輕鏈引物的單細(xì)胞PCR,可以在疫苗接種后第4-7天從中國獼猴CD3-CD14-CD56-CD19-CD27-CD20-.lowCD80+HLA-DR+CD95+漿母細(xì)胞克隆流感特異性單克隆抗體。我們的工作定義了用于分離抗體分泌的中國獼猴漿母細(xì)胞的表型標(biāo)記,并且對于評估疫苗接種誘導(dǎo)的漿母細(xì)胞應(yīng)答以及使用中國獼猴快速有效地克隆單克隆抗體具有重要意義。
【學(xué)位單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R392-33
【部分圖文】：

?中國獼猴漿母細(xì)胞的表型鑒定及其在篩選流感特異性抗體中的應(yīng)用???核糖核蛋白（ＲＮＰ）相互作用。ＲＮＰ由８個負(fù)鏈ＲＮＡ片段和核蛋白（ＮＰ）以??及聚合酶復(fù)合物異源三聚體（ＰＢ２，ＰＢ１和ＰＡ）組成，核輸出蛋白（ＮＥＰ，或非??結(jié)構(gòu)蛋白２，?ＮＳ２）包含在病毒體內(nèi)，但非結(jié)構(gòu)蛋白１?（ＮＳ１）不包含在病毒體內(nèi)??［４８］。根據(jù)Ａ型流感的兩種表面糖蛋白即血凝素和神經(jīng)氨酸酶的抗原特性，進(jìn)一??步將其分類為１８個ＨＡ亞型（Ｈ１－Ｈ１８）和１１個ＮＡ亞型（Ｎｌ－Ｎｌｌ），ＨＡ蛋白??對于結(jié)合細(xì)胞受體以及病毒和內(nèi)體膜的融合至關(guān)重要，ＮＡ蛋白通過從細(xì)胞和病??毒ＨＡ和ＮＡ蛋白中去除唾液酸來促進(jìn)病毒從感染細(xì)胞中釋放［４５，５（），５１］。??

?中國獼猴漿母細(xì)胞的表型鑒定及其在篩選流感特異性抗體中的應(yīng)用???Ｍａｒｋｅｒ?為?ＣＤ３—ＣＤ１９＋ＣＤ２〇－／ｂｗＣＤ２７ｈｌＣＤ３８ｈｉ，我們想確定人的漿母細(xì)胞?ｍａｒｋｅｒ??是否可以應(yīng)用于中國獼猴的漿母細(xì)胞。我們分別取免疫流感疫苗志愿者和免疫滅??活流感病毒中國獼猴０天，免疫后７天，１４天，２８天的外周血，分離ＰＢＭＣ，??用人類漿母細(xì)胞細(xì)胞的表面Ｍａｒｋｅｒ去分析人與中國獼猴的漿母細(xì)胞。同時將漿??母細(xì)胞分選出來，用Ｂ細(xì)胞Ｅｌｉｓｐｏｔ驗證是否分泌特異性的抗體。??Ｇａｔｅｄ?ｏｎ?ＣＤ３?ＣＤ１９＋ＣＤ２０々，ＯＷ??

ＣＤ３３?Ｖｉｒｕｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ??圖２．１人的漿母細(xì)胞ｍａｒｋｅｒ不能鑒定中國獼猴的漿母細(xì)胞??圖注：橫坐標(biāo)為ＣＤ３８分子，縱坐標(biāo)為ＣＤ２７分子。Ｅｌｉｓｐｏｔ檢驗了免疫后７天時外周血??ＰＢＭＣ與用人漿母細(xì)胞Ｍａｒｋｅｒ分選到的人與猴子的漿母細(xì)胞。??我們發(fā)現(xiàn)人的漿母細(xì)胞Ｍａｒｋｅｒ是沒有問題的，在免疫疫苗后人外周血中的??漿母細(xì)胞比例逐漸升高，在免疫后７天時，此時人外周血中漿母細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到??頂峰，且大多數(shù)都是特異性的，隨后比例逐漸下降。但是在中國獼猴外周血中利??用人的漿母細(xì)胞Ｍａｒｋｅｒ我們無法分選到分泌特異性抗體的漿母細(xì)胞，所以我們??得出結(jié)論，人類的漿母細(xì)胞Ｍａｒｋｅｒ無法應(yīng)用于鑒定中國獼猴的漿母細(xì)胞，因此我??們需要鑒定中國獼猴漿母細(xì)胞的表型。??２．４．２人類漿母細(xì)胞高表達(dá)增值相關(guān)抗原Ｋｉ６７。??Ｋｉ６７為一種細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，蛋白比較保守，其表達(dá)量與增殖速度??成正比。由于漿母細(xì)胞處于生發(fā)中心中
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本文編號：2864592