發(fā)布時(shí)間：2020-10-20 23:48

　　 炎癥,干細(xì)胞和癌癥之間的關(guān)系已經(jīng)有了相當(dāng)?shù)恼J(rèn)識(shí),傷口中炎癥過(guò)程與許多腫瘤的病理狀態(tài)有很大的相似之處。皮膚損傷期間,上皮損失細(xì)胞的補(bǔ)給是由表皮干細(xì)胞受促炎因子刺激后增殖提供的,并且除了細(xì)胞因子,傷口愈合期間淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放大量生長(zhǎng)因子,可以促進(jìn)干細(xì)胞的增殖和可塑性。但是傷口愈合過(guò)程中的炎癥微環(huán)境如何刺激干細(xì)胞及干細(xì)胞如何做出反應(yīng)的機(jī)制知之甚少。本論文探究了毛囊干細(xì)胞在皮膚損傷中被激活的分子機(jī)理。首先,本論文觀察到了表皮和毛囊干細(xì)胞在損傷后AKT磷酸化(AKT-P)顯著提高,同時(shí)損傷導(dǎo)致小鼠傷口周圍休止期的毛囊急劇轉(zhuǎn)變?yōu)樯L(zhǎng)初期階段。我們還發(fā)現(xiàn),和隆凸部位的干細(xì)胞相比,毛囊胚芽中的LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞較早響應(yīng)了組織損傷后開(kāi)始增殖,同時(shí)LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞參與傷口愈合,但愈合后該細(xì)胞從上皮中消失。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)AKT或PI3K的抑制阻止了毛囊從休止期向生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)換,而抑制PTEN活性可以導(dǎo)致毛囊從休止期向生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)換。在LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞中敲除PTEN可以導(dǎo)致LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞AKT磷酸化增加,同時(shí)加速毛囊從休止期向生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)變。我們進(jìn)一步探究了LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞在毛囊中是可以被取代的,雖然LGR5陽(yáng)性干細(xì)胞去除掉以后確實(shí)延緩了毛囊再生過(guò)程,但隆凸部位的CD34陽(yáng)性干細(xì)胞隨后會(huì)再生出丟失的LGR5細(xì)胞。其次,還發(fā)現(xiàn)通過(guò)地塞米松或NF-κB抑制劑可以抑制損傷誘導(dǎo)毛囊干細(xì)胞AKT磷酸化和毛囊的休止期-生長(zhǎng)期轉(zhuǎn)變。此外,局部注射LPS活化的巨噬細(xì)胞可以誘導(dǎo)表皮細(xì)胞的AKT-P和毛囊進(jìn)入生長(zhǎng)期,而在小鼠中去除巨噬細(xì)胞后導(dǎo)致?lián)p傷誘導(dǎo)的干細(xì)胞AKT-P和毛囊生長(zhǎng)現(xiàn)象消失。使用Cx3cr1Cre ER/R26i DTR小鼠去除CX3CR1high組織巨噬細(xì)胞,進(jìn)一步表明Ly6ChighCX3CR1low炎性巨噬細(xì)胞,而不是Ly6ClowCX3CR1high組織巨噬細(xì)胞在損傷后誘導(dǎo)的干細(xì)胞活化和毛囊生長(zhǎng)總之,本論文的研究表明,皮膚急性損傷后招募炎性巨噬細(xì)胞到傷口周圍,同時(shí)巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放炎性因子,激活LGR5毛囊干細(xì)胞中PI3K/AKT信號(hào),從而導(dǎo)致毛囊再生。
【學(xué)位單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R363
【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 毛囊和毛囊干細(xì)胞概述
        1.1.1 毛囊的發(fā)育的信號(hào)調(diào)控
        1.1.2 毛囊周期的信號(hào)調(diào)控
    1.2 毛囊干細(xì)胞及其特征描述
        1.2.1 毛囊干細(xì)胞參與皮膚傷口愈合
        1.2.2 毛囊干細(xì)胞與毛囊再生
    1.3 皮膚損傷后的炎癥反應(yīng)與組織修復(fù)
        1.3.1 皮膚損傷后參與傷口修復(fù)的細(xì)胞和分子
        1.3.2 浸潤(rùn)到傷口周圍巨噬細(xì)胞的生理功能
        1.3.3 浸潤(rùn)到傷口周圍巨噬細(xì)胞的不同亞群
        1.3.4 浸潤(rùn)到傷口周圍的肥大細(xì)胞及其生理功能
        1.3.5 浸潤(rùn)到傷口周圍的T細(xì)胞及其生理功能
    1.4 組織損傷后的炎癥反應(yīng)與干細(xì)胞激活
        1.4.1 炎癥對(duì)組織再生和干細(xì)胞的影響
        1.4.2 不同的組織中炎癥和干細(xì)胞的影響
    1.5 組織損傷后的炎癥反應(yīng)與癌癥
        1.5.1 傷口愈合與癌癥的區(qū)別
        1.5.2 傷口愈合與癌癥的相關(guān)性
    1.6 研究目的和內(nèi)容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 研究?jī)?nèi)容
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)小鼠
    2.2 試劑與抗體
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.2 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 單通道基因表達(dá)譜芯片分析（ Microarry）
        2.4.1 免疫細(xì)胞RNA的提取
        2.4.2 對(duì)樣品純化RNA進(jìn)行熒光標(biāo)記（ c RNA擴(kuò)增標(biāo)記試劑盒）
        2.4.3 雜交與清洗
        2.4.4 芯片掃描
        2.4.5 芯片圖像的采集和數(shù)據(jù)分析
第3章 損傷誘導(dǎo)的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    3.1 本章引言
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 皮膚損傷誘導(dǎo)傷口周圍的毛囊進(jìn)入生長(zhǎng)期
        3.2.2 皮膚損傷增強(qiáng)傷口周圍的表皮和毛囊干細(xì)胞的磷酸化水平
        3.2.3 皮膚損傷Lgr5+毛囊干細(xì)胞的磷酸化水平
    3.3 小結(jié)
第4章 Lgr5+細(xì)胞決定毛囊周期轉(zhuǎn)換
    4.1 本章引言
    4.2 Lgr5+細(xì)胞缺失不影響毛囊進(jìn)入再生周期
    4.3 Lgr5+細(xì)胞缺失后會(huì)使毛囊周期轉(zhuǎn)換顯著滯后
    4.4 PI3K/Akt信號(hào)通路影響毛囊再生周期的轉(zhuǎn)變
    4.5 Lgr5+細(xì)胞內(nèi)特異性的敲除Pten基因促進(jìn)毛囊進(jìn)入再生周期
    4.6 小結(jié)
第5章 損傷誘導(dǎo)的毛囊周期轉(zhuǎn)換與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)
    5.1 本章引言
    5.2 地塞米松抑制正常的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    5.3 地塞米松抑制損傷誘導(dǎo)的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    5.4 傷口周圍的CD45陽(yáng)性白細(xì)胞以F4/80陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞為主
    5.5 地塞米松抑制免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和Lgr5+細(xì)胞的Akt磷酸化
    5.6 JSH-23抑制免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和Lgr5+細(xì)胞的Akt磷酸化
    5.7 小結(jié)
第6章 巨噬細(xì)胞是損傷周圍毛囊周期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵因素
    6.1 本章引言
    6.2 LPS激活的巨噬細(xì)胞可以誘導(dǎo)毛囊進(jìn)入再生周期
    6.3 氯膦酸鹽脂質(zhì)體去除巨噬細(xì)胞阻止損傷引起的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    6.4 皮膚干細(xì)胞毛囊重組去除巨噬細(xì)胞減少了毛囊形成數(shù)量
    6.5 小結(jié)
第7章 Ly6C+巨噬細(xì)胞決定傷口周圍毛囊周期的轉(zhuǎn)變
    7.1 本章引言
    7.2 小鼠可以特異性的去除CX3CR1陽(yáng)性的組織駐留巨噬細(xì)胞
    7.3 去除CX3CR1巨噬細(xì)胞不會(huì)影響損傷引起的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    7.4 Ly6C炎性巨噬細(xì)胞的去除會(huì)抑制損傷引起的毛囊周期轉(zhuǎn)變
    7.5 小結(jié)
第8章 討論與展望
    8.1 炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)毛囊進(jìn)入再生周期，而非抑制毛囊移植毛囊進(jìn)入再生周期
    8.2 毛囊干細(xì)胞Akt磷酸化是毛囊進(jìn)入生長(zhǎng)周期的充分必要條件
    8.3 損傷誘導(dǎo)的毛囊周期轉(zhuǎn)換與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)
    8.4 巨噬細(xì)胞是損傷周圍毛囊周期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵因素
    8.5 Ly6C+巨噬細(xì)胞決定傷口周圍毛囊周期的轉(zhuǎn)變
    8.6 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果

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