目的本研究通過已建立的穩(wěn)定表達人血小板CD36的HEK293T細胞系,制備鼠源的抗人CD36單克隆抗體并進行特性鑒定。方法利用已經建立的穩(wěn)定表達人血小板CD36的HEK293T細胞系對CD36(-/-)C57小鼠進行免疫,取脾臟與小鼠骨髓瘤細胞融合,篩選出陽性克隆。純化單克隆抗體后,利用Western blot檢測抗體結合活性。利用小鼠IgG類/單抗亞型鑒定試劑鑒定單克隆抗體的抗體亞型。通過流式細胞檢測和血小板抗原單克隆抗體特異性免疫固定檢測(MAIPA)鑒定其診斷應用價值。結果經篩選后得到一株雜交瘤細胞,抗體亞型為IgG2a,輕鏈為κ鏈,Western blot試驗表明該單克隆抗體特異性識別人血小板CD36抗原。MAIPA結果顯示,與商業(yè)化單克隆抗體FA6-152相比,該單克隆抗體靈敏度更高。結論成功制備了一種鼠抗人CD36單克隆抗體,為臨床鑒定CD36抗體,篩選CD36陰性獻血員提供了新的工具,也為今后進一步研究CD36在血液免疫疾病中作用機制提供了實驗基礎。
【部分圖文】：

單克隆抗體亞型鑒定結果圖

人血小板裂解液與單克隆抗體western blot鑒定結果

2.5 人血小板CD36表達流式細胞檢測由血小板流式細胞鑒定結果可知,此單克隆抗體可以特異性識別人血小板CD36蛋白的表達情況,可以用于臨床CD36表達缺失獻血員的篩選。
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