目的本研究通過已建立的穩(wěn)定表達(dá)人血小板CD36的HEK293T細(xì)胞系,制備鼠源的抗人CD36單克隆抗體并進(jìn)行特性鑒定。方法利用已經(jīng)建立的穩(wěn)定表達(dá)人血小板CD36的HEK293T細(xì)胞系對(duì)CD36(-/-)C57小鼠進(jìn)行免疫,取脾臟與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合,篩選出陽性克隆。純化單克隆抗體后,利用Western blot檢測(cè)抗體結(jié)合活性。利用小鼠IgG類/單抗亞型鑒定試劑鑒定單克隆抗體的抗體亞型。通過流式細(xì)胞檢測(cè)和血小板抗原單克隆抗體特異性免疫固定檢測(cè)(MAIPA)鑒定其診斷應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果經(jīng)篩選后得到一株雜交瘤細(xì)胞,抗體亞型為IgG2a,輕鏈為κ鏈,Western blot試驗(yàn)表明該單克隆抗體特異性識(shí)別人血小板CD36抗原。MAIPA結(jié)果顯示,與商業(yè)化單克隆抗體FA6-152相比,該單克隆抗體靈敏度更高。結(jié)論成功制備了一種鼠抗人CD36單克隆抗體,為臨床鑒定CD36抗體,篩選CD36陰性獻(xiàn)血員提供了新的工具,也為今后進(jìn)一步研究CD36在血液免疫疾病中作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【部分圖文】：

單克隆抗體亞型鑒定結(jié)果圖

人血小板裂解液與單克隆抗體western blot鑒定結(jié)果

2.5 人血小板CD36表達(dá)流式細(xì)胞檢測(cè)由血小板流式細(xì)胞鑒定結(jié)果可知,此單克隆抗體可以特異性識(shí)別人血小板CD36蛋白的表達(dá)情況,可以用于臨床CD36表達(dá)缺失獻(xiàn)血員的篩選。
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