目的:探討miR-125b緩解肝缺血再灌注損傷的相關(guān)分子機制,明確miR-125b在體內(nèi)外模型中緩解肝缺血再灌注損傷的功能。方法:建立小鼠肝缺血再灌注體內(nèi)、體外模型。使用qRT-PCR檢測miR-125b、TNF-α、IL-1β、IL-6和TRAF6的RNA水平;使用免疫熒光評估p-p65、TRAF6在細(xì)胞中的定位與表達;使用Western Blot檢測p-p65、p65、TRAF6、IL-1β的蛋白表達;使用ELISA檢測TNF-α、IL-1β和IL-6的表達;使用HE染色觀察肝臟組織的形態(tài)學(xué)改變;使用肝功能檢測試劑盒檢測ALT和AST的水平。結(jié)果:qRT-PCR結(jié)果顯示肝缺血再灌注體外模型中miR-125b的表達顯著下調(diào)(p0.05),而TNF-α、IL-1β、IL-6和TRAF6的表達顯著上調(diào)(p0.05)。使用miR-125b mimics轉(zhuǎn)染細(xì)胞上調(diào)miR-125b水平后,p-p65及TRAF6免疫熒光染色強度減弱,而miR-125b inhibitors則能逆轉(zhuǎn)這一效果。使用miR-125b inhibitors下調(diào)miR-125b后,Western Blot結(jié)果顯示p-p65、TRAF6及IL-1β的表達顯著升高(p0.01),ELISA提示炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平顯著升高(p0.05),HE染色觀察到小鼠肝組織病理改變增加(p0.05),肝功能檢測結(jié)果則提示血清ALT和AST水平顯著升高(p0.05)。結(jié)論:miR-125b能夠通過抑制TRAF6和NF-κB,下調(diào)炎性因子的釋放并改善小鼠肝臟功能,從而達到緩解小鼠肝缺血再灌注損傷的目的。本文淺析了miR-125b緩解肝缺血再灌注炎癥、改善肝臟功能的相關(guān)分子機制,驗證了miR-125b在體內(nèi)、體外實驗中的抑炎功能,為臨床肝缺血再灌注損傷的治療提供了理論基礎(chǔ)及潛在的治療靶點。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R-332;R657.3
【部分圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文小時組之間相比，miR-125b 水平并無顯著差異。故最終選擇缺氧時間（圖 1a）。固定缺氧時間為 12 小時，設(shè)置復(fù)氧時間梯度 1、6、12、24 小 檢測 miR-125b 表達水平的變化。結(jié)果表明：當(dāng)復(fù)氧時間為 6iR-125b 顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ap<0.05）；當(dāng)復(fù)氧時間為b 下調(diào)更加顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（bp<0.01）。綜上所述，我時、復(fù)氧 24 小時為最佳 H/R 時間組合，以進行后續(xù)實驗（圖 1

1 不同 H/R 時間組合下 miR-125b 的表達水平變 relative level of miR-125b upon different H/R timompared with Ctrl group.bp<0.01 compared with 25b mimics 和 inhibitors 后，檢測 mi-125b mimics、inhibitors、NC 以及 ddwa情況。與對照組相比，miR-125b mimics 組ibitors 組 miR-125b 水平顯著降低（ap<0.05）圖 2），表明轉(zhuǎn)染成功。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文3 轉(zhuǎn)染 miR-125b mimics 和 inhibitors 后，檢測 TRAF6 及炎性因 mRNA 變化對轉(zhuǎn)染過的細(xì)胞進行 H/R 處理，檢測炎性因子與 TRAF6 的 mRNA 水平變果提示，H/R 處理后，NC 組炎性因子與 TRAF6 的 mRNA 水平均顯著高于對（ap<0.05）。轉(zhuǎn)染了 miR-125b mimics 的細(xì)胞 TNF-α、IL6、IL-1β以及 TRAFNA 水平均顯著低于 NC 組（cp<0.01），而轉(zhuǎn)染了 miR-125b inhibitors 的細(xì)胞炎性因子與 TRAF6 的 mRNA 水平均顯著高于 NC 組（cp<0.01）。該結(jié)果提示用 mimics 提高 miR-125b 的表達可以降低炎性因子的釋放，miR-125b inhib可以通過下調(diào) miR-125b 從而逆轉(zhuǎn)這一情況，加重炎癥的發(fā)生（圖 3）。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 鄭樹森;俞軍;張武;;肝移植在中國的發(fā)展現(xiàn)狀[J];臨床肝膽病雜志;2014年01期

2 周維;謝肇;許建中;;miR-125b調(diào)節(jié)C3H10T1/2間充質(zhì)干細(xì)胞中Cbfβ的表達[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2012年11期

本文編號：2847348