研究目的：γδT細(xì)胞是參與宿主固有免疫應(yīng)答的主要效應(yīng)細(xì)胞,是橋聯(lián)固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。有研究報(bào)道,IL-17~+γδT能夠抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖及功能。本研究利用TCRδ-/-小鼠探討沙眼衣原體小鼠肺炎癥中產(chǎn)生IL-17的γδT細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞增殖的影響以及可能的作用機(jī)制,為γδT細(xì)胞與Treg細(xì)胞相互作用提供理論依據(jù),也為固有免疫和適應(yīng)性免疫的相互調(diào)節(jié)增添新的內(nèi)容。研究方法：取6-δ周齡雌性WT(C57BL/6)和TCRδ~(-/-)(C57BL/6遺傳背景)小鼠,經(jīng)鼻吸入1×10~3 IFU沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlymydia muridarum, Cm),誘導(dǎo)小鼠沙眼衣原體肺炎。在感染的不同時(shí)間點(diǎn)處死小鼠,收集肺泡灌洗液,制備肺組織單個(gè)核細(xì)胞懸液,用熒光素標(biāo)記的抗鼠CD3、γδT抗體染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)γδT的增殖利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)檢測(cè)肺組織CD3~+γδT細(xì)胞及Vγ1和Vγ4γδT細(xì)胞亞群分泌IL一17水平；用ELISA方法檢測(cè)WT和TCRδ-/-小鼠肺泡灌洗液中IL-17含量,探討Cm呼吸道感染誘導(dǎo)的γδT細(xì)胞增殖及IL-17的產(chǎn)生。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)WT和TCRδ-/-小鼠脾臟及肺組織CD4~+CD25~+T及CD25~+Foxp3~+T細(xì)胞水平,確定沙眼衣原體呼吸道感染誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞的增殖；進(jìn)一步利用RT-PCR技術(shù)探討WT和TCRδ-/-小鼠肺組織Treg細(xì)胞相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA表達(dá)以及與Treg細(xì)胞活化及功能相關(guān)的細(xì)胞因子IL-2、TGF-β和IL-10 mRNA表達(dá)水平改變,從而探討γδT細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞增殖的影響以及可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)鼻腔吸入一定劑量的Cm誘導(dǎo)小鼠沙眼衣原體肺炎及CD3~+γδT~+細(xì)胞在小鼠肺組織的增殖及產(chǎn)生大量IL-17。感染第1天CD3~+γδT~+細(xì)胞百分率即開始增高(*P0.05),于感染第7天達(dá)到高峰(***P0.001),隨后降低,到感染第10天基本下降到未感染水平；細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色結(jié)果顯示Cm感染誘導(dǎo)γδT細(xì)胞在感染第一天既分泌大量的IL-17(**P0.01),至感染第三天達(dá)到高峰(***P0.001),至感染后第五天γδT細(xì)胞產(chǎn)生IL-17的水平已顯著降低(*P0.05)。進(jìn)一步我們對(duì)小鼠肺組織存在的兩個(gè)重要的γδT細(xì)胞亞群Vγ1和Vγ4 IL-17的分泌進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示Cm感染小鼠肺組織Vγ1基本不分泌IL-17,而Vγ4則分泌大量的IL-17,尤其是在感染第3天(***P0.001)達(dá)到分泌高峰,隨后迅速降低,至感染第10天降低至基礎(chǔ)水平,其變化趨勢(shì)與γδT細(xì)胞分泌IL-17一致。另外,我們的結(jié)果還證實(shí),γδT細(xì)胞是感染早期IL-17的主要來源,TCRδ-/-小鼠肺泡灌洗液BAL中IL-17水平顯著低于WT小鼠*P0.05)。Cm感染能夠誘導(dǎo)小鼠外周免疫器官及局部炎癥部位Treg細(xì)胞增殖。與WT小鼠比較,TCRδ-/-小鼠脾組織Treg細(xì)胞百分率在感染后第3天顯著升高(**p0.01),而感染第7天則顯著降低(**p0.01)；進(jìn)一步肺組織中Treg相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3mRNA表達(dá)趨勢(shì)與脾臟Treg細(xì)胞的變化一致(*P0.05),提示在Cm感染的不同時(shí)間點(diǎn),γδT細(xì)胞通過不同的途徑調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步對(duì)其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),感染后第3天WT和TCR6-/-小鼠肺組織Treg細(xì)胞活化因子IL-2 mRNA僅微量表達(dá),而感染后第7天IL-2 mRNA在兩組小鼠肺組織明顯表達(dá),且TCRδ-/-小鼠明顯低于WT小鼠(**P0.01)。肺組織Treg細(xì)胞功能性細(xì)胞因子TGF-p和IL-10的PCR結(jié)果顯示感染第3天TCRδ-/-小鼠IL-10水平明顯高于WT小鼠*P0.05)而感染第7天IL-10分泌明顯降低(*P0.05),與Treg細(xì)胞增殖變化一致,而肺組織TGF-β mRNA表達(dá)在兩組小鼠未見明顯差異。結(jié)論：Cm呼吸道感染誘導(dǎo)小鼠肺組織γδT細(xì)胞增殖并在感染早期分泌大量的IL-17,γδT細(xì)胞是感染早期IL-17的主要來源,其中Vγ4是分泌IL-17的主要γδT細(xì)胞亞群。Cm感染能夠誘導(dǎo)小鼠外周免疫器官及局部炎癥部位Treg細(xì)胞增殖,在Cm呼吸道感染中存在著γδT細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié),但在感染的不同階段調(diào)節(jié)機(jī)制不同,感染早期,γδT細(xì)胞可能通過分泌大量的IL-17抑制Treg細(xì)胞增殖,至感染中期IL-2的大量產(chǎn)生,可能是通過IL-2/IL-2R途徑促進(jìn)Treg細(xì)胞；在沙眼衣原體感染中,γδT細(xì)胞主要通過影響Treg細(xì)胞功能性細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)介導(dǎo)Treg細(xì)胞的免疫抑制功能。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R374
【部分圖文】：

結(jié)果感染誘導(dǎo) γδT 細(xì)胞增殖及產(chǎn)生大量的 IL-17 呼吸道感染誘導(dǎo) γδ T 細(xì)胞在小鼠肺組織增殖T 細(xì)胞作為固有免疫細(xì)胞，在病原體入侵機(jī)體后可以是機(jī)體抗感染的第一道防線。我們用一定劑量的沙m）經(jīng)呼吸道感染 WT 小鼠誘導(dǎo)小鼠衣原體肺炎，在，制備肺組織單個(gè)核細(xì)胞，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CD顯示，小鼠肺組織中 CD3+γδ+T 細(xì)胞百分率在沙眼衣始增多（*P<0.05），至感染第 7 天達(dá)到最高水平（*復(fù)到正常水平。結(jié)果提示，沙眼衣原體呼吸道感染誘小鼠肺組織增殖。

Cm 感染誘導(dǎo)小鼠肺組織 γδ T 細(xì)胞 IL-17 的分泌及肺泡灌洗液 IL-17 水平 A、B Secrection of IL-17 by γδ T cells after Cm infection in WT miceproduction of IL-17 in BAL of WT and TCRδ-/-mice. The results were premean ± SD, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.γ4 為 Cm 感染后主要分泌 IL-17 的 γδT 細(xì)胞亞群據(jù)γ鏈和δ鏈的不同，γδT 細(xì)胞分為多個(gè)亞群，其中 Vγ1 和 Vγ4亞群，二者在多種免疫應(yīng)答中具有不同的調(diào)控作用[43]。為進(jìn)一的來源，我們利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色分別對(duì) Cm 誘導(dǎo)的肺組織 泌 IL-17 水平進(jìn)行測(cè)定。流式結(jié)果顯示，在疾病進(jìn)程中 Vγ1 基本IL-17+ Vγ1 僅占全部 γδT 的 1%左右（圖 1.3A）；而 Vγ4 在未感染泌一定量的 IL-17(約 12.3%)，感染后第 1 天分泌量開始增高，第感染第10天基本恢復(fù)正常水平（圖1.3B、C *P<0.05，**P<0.01，***P 細(xì)胞分泌 IL-17 趨勢(shì)一致，結(jié)果提示，Vγ4 是沙眼衣原體呼吸道感

23.3 WT 小鼠在 Cm 感染后 Vγ1 和 Vγ4 分泌 IL-17 水平.3 Secrection of IL-17 by Vγ1 and Vγ4 T cells after Cm infection in WT mice. The were presented as mean ± SD, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.
【參考文獻(xiàn)】

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1 唐瑩瑩;喬賽;趙慧麗;王悅;劉騰麗;邢冬紅;張永慈;白虹;;沙眼衣原體小鼠肺炎株呼吸道感染誘導(dǎo)肺組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及活化[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2014年12期

本文編號(hào)：2847322