發(fā)布時間：2020-10-10 16:32

　　 介孔二氧化硅納米材料(MSs)具有優(yōu)良的理化性質(zhì),諸如大的比表面積、高的孔體積、表面易修飾以及制備過程簡單、反應參數(shù)易調(diào)控等優(yōu)點。過去幾十年,MSNs越來越多被應用于催化、生物傳感、能量存儲、小分子/大分子藥物傳輸、蛋白/多肽等生物分子固定等領(lǐng)域。而近幾年,無機MSs作為一種很有希望替代傳統(tǒng)乳劑或脂質(zhì)體等佐劑的納米材料,在免疫領(lǐng)域的應用引起了越來越多的人的關(guān)注。本論文將O型口蹄疫病毒樣顆粒(VLPs)作為抗原,豚鼠作為動物模型;3種不同結(jié)構(gòu)的介孔二氧化硅納米顆粒作為佐劑負載VLPs后進行豚鼠免疫實驗。通過細胞毒性實驗、溶血實驗、細胞內(nèi)吞實驗、組織病理學分析和體外降解實驗考察了3種介孔材料的生物相容性。檢測了免疫后豚鼠的特異性抗體、中和抗體,并計算攻毒后的保護率。從抗體水平以及攻毒后的保護率實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種介孔材料均具有一定的佐劑效果。本論文的研究工作為介孔二氧化硅納米材料應用于免疫領(lǐng)域的研究提供了一定實驗基礎(chǔ)。主要工作如下:1.介孔二氧化硅納米材料的合成及表征。以TEOS為硅源、CTAB為表面活性劑、PS微球為模板在乙醇-水相中制備得到中空介孔二氧化硅(HMSNs);以TEOS為硅源、CTAC為表面活性劑、TEA為催化劑在乙氯苯-水相中制備得到樹枝狀介孔二氧化硅(MSNs);以實心二氧化硅為底物、TEOS為硅源、CTAC為表面活性劑、TEA為催化劑在氯苯-水相中制備得到核錐狀介孔二氧化硅(DMSNs),并且考察了底物(SN100)量、反應條件(溫度、轉(zhuǎn)速和反應時間)和反應試劑(TEOS、CTAC、H_2O、氯苯和TEA)這9個因素變化對合成DMSNs的影響。對HMSNs、MSNs和DMSNs做了TEM、SEM、BET、BJH、FTIR等物化表征。2.介孔二氧化硅納米顆粒的生物相容性。通過溶血實驗、細胞毒性實驗和體外降解實驗等方面考察了介孔二氧化硅納米顆粒的生物相容性。3.豚鼠免疫及攻毒實驗。將3種不同結(jié)構(gòu)的介孔二氧化硅納米顆粒負載VLPs后免疫豚鼠,通過檢測特異性抗體、中和抗體水平以及攻毒保護率來考察3種介孔材料的佐劑效果。
【學位單位】：蘭州理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：O613.72;R392-33
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 口蹄疫疫苗研究進展
    1.2 納米佐劑研究進展
    1.3 介孔二氧化硅材料研究進展
        1.3.1 介孔二氧化硅材料作為疫苗佐劑研究進展
        1.3.2 介孔二氧化硅材料合成與制備
        1.3.3 介孔二氧化硅材料其他生物學應用
    1.4 本論文的研究設(shè)想
第2章 中空介孔二氧化硅的合成及應用
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 主要試劑和儀器設(shè)備
        2.2.2 中空介孔二氧化硅的合成
        2.2.3 中空介孔二氧化硅的血液相容性
        2.2.4 中空介孔二氧化硅的細胞毒性
        2.2.5 中空介孔二氧化硅的細胞內(nèi)吞實驗
        2.2.6 中空介孔二氧化硅的組織病理學分析—HE染色實驗
        2.2.7 中空介孔二氧化硅的體外降解性研究
        2.2.8 豚鼠免疫實驗
            2.2.8.1 SDS-PAGE凝膠電泳確定最佳結(jié)合比例
            2.2.8.2 豚鼠免疫實驗
        2.2.9 特異性抗體和中和抗體檢測
            2.2.9.1 特異性抗體檢測
            2.2.9.2 中和抗體檢測
        2.2.10 豚鼠攻毒實驗
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 中空介孔二氧化硅的表征
        2.3.2 中空介孔二氧化硅的血液相容性結(jié)果
        2.3.3 中空介孔二氧化硅的細胞毒性結(jié)果
        2.3.4 中空介孔二氧化硅的細胞內(nèi)吞實驗結(jié)果
        2.3.5 中空介孔二氧化硅的組織病理學分析—HE染色實驗結(jié)果
        2.3.6 中空介孔二氧化硅的體外可降解性
        2.3.7 豚鼠免疫實驗及抗體檢測結(jié)果
            2.3.7.1 SDS-PAGE凝膠電泳實驗結(jié)果
            2.3.7.2 特異性抗體和中抗體檢測結(jié)果
        2.3.8 豚鼠攻毒實驗結(jié)果
    2.4 結(jié)論
第3章 樹枝狀介孔二氧化硅的合成及應用
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 主要試劑和儀器設(shè)備
        3.2.2 樹枝狀介孔二氧化硅的合成
        3.2.3 樹枝狀介孔二氧化硅的血液相容性
        3.2.4 樹枝狀介孔二氧化硅的細胞毒性
        3.2.5 樹枝狀介孔二氧化硅的組織病理學分析—HE染色實驗
        3.2.6 樹枝狀介孔二氧化硅的體外降解性研究
        3.2.7 豚鼠免疫實驗
            3.2.7.1 SDS-PAGE凝膠電泳確定最佳結(jié)合比例
            3.2.7.2 MSNs對 VLPs抗原的負載率
            3.2.7.3 豚鼠免疫實驗
        3.2.8 特異性抗體和中和抗體檢測
            3.2.8.1 特異性抗體檢測
            3.2.8.2 中和抗體檢測
        3.2.9 豚鼠攻毒實驗
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 樹枝狀介孔二氧化硅的表征
        3.3.2 樹枝狀介孔二氧化硅的血液相容性結(jié)果
        3.3.3 樹枝狀介孔二氧化硅的細胞毒性結(jié)果
        3.3.4 樹枝狀介孔二氧化硅的組織病理學分析—HE染色實驗
        3.3.5 樹枝狀介孔二氧化硅的體外可降解性
        3.3.6 豚鼠免疫實驗及抗體檢測結(jié)果
            3.3.6.1 SDS-PAGE凝膠電泳實驗結(jié)果
            3.3.6.2 MSNs對 VLPs抗原的負載率結(jié)果
            3.3.6.3 特異性抗體和中和抗體檢測結(jié)果
        3.3.7 豚鼠攻毒實驗結(jié)果
    3.4 結(jié)論
第4章 核錐狀介孔二氧化硅的合成及應用
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 主要試劑和儀器設(shè)備
        4.2.2 核錐狀介孔二氧化硅的系統(tǒng)合成研究
        4.2.3 核錐狀介孔二氧化硅的血液相容性
        4.2.4 核錐狀介孔二氧化硅的細胞毒性
        4.2.5 核錐狀介孔二氧化硅的體外降解性研究
        4.2.6 豚鼠免疫實驗
            4.2.6.1 SDS-PAGE凝膠電泳確定最佳結(jié)合比例
            4.2.6.2 豚鼠免疫實驗
        4.2.7 特異性抗體和中和抗體檢測
            4.2.7.1 特異性抗體檢測
            4.2.7.2 中和抗體檢測
        4.2.8 豚鼠攻毒實驗
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 核錐狀介孔二氧化硅系統(tǒng)合成的表征
        4.3.2 核錐狀介孔二氧化硅的血液相容性結(jié)果
        4.3.3 核錐狀介孔二氧化硅的細胞毒性
        4.3.4 核錐狀介孔二氧化硅的體外可降解性
        4.3.5 豚鼠免疫實驗及抗體檢測結(jié)果
            4.3.5.1 SDS-PAGE凝膠電泳實驗結(jié)果
            4.3.5.2 特異性抗體和中和抗體檢測結(jié)果
        4.3.6 豚鼠攻毒實驗結(jié)果
    4.4 結(jié)論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄 攻讀碩士學位期間所發(fā)表的學術(shù)論文

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本文編號：2835314