目的:通過構(gòu)建2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)大鼠模型,觀察大鼠的體重、空腹血糖、生化指標(biāo)變化和腎臟的病理改變以及與腎臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相關(guān)的p-JNK、Caspase-12蛋白的表達(dá)情況,探究利拉魯肽對(duì)T2D大鼠腎臟保護(hù)的可能機(jī)制。方法:30只SD大鼠(雄)先在山西省人民醫(yī)院動(dòng)物房進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,隨機(jī)地選擇其中6只做為正常對(duì)照組(NC組),喂予常規(guī)飼料,而剩下的24只作為2型糖尿病造模組,給予的飼料是高糖高脂飼料,時(shí)間為1月。1月后,大鼠禁食(需保證飲水)12h,稱重大鼠算出鏈脲佐菌素(STZ)的劑量(按40mg/kg),從腹部給要造模的24只大鼠注射入檸檬酸/檸檬酸鈉稀釋的STZ,6只正常對(duì)照組大鼠注射等劑量的檸檬酸/檸檬酸鈉。注入STZ三天后,消毒大鼠尾部采血,血糖大于等于16.7mmol/L視為模型制備成功。將造模組造模成功的大鼠隨機(jī)地分為三組:糖尿病對(duì)照組(DMC組)、利拉魯肽100ug/kg干預(yù)組(LIR-L組)、利拉魯肽200ug/kg干預(yù)組(LIR-H組)。分組完成后,LIR-L組和LIR-H組即開始每天經(jīng)皮下注射一次諾和力(利拉魯肽)干預(yù)8周,劑量分別是100ug/kg、200ug/kg;NC組和DMC組注射相同劑量的生理鹽水處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測量大鼠體重和記錄大鼠血糖,留取24小時(shí)尿量檢測尿液相關(guān)指標(biāo)和采血檢測血脂、空腹胰島素、腎功能;采用常規(guī)(HE)、特殊(PAS)兩種不同染色方法制備病理切片觀察各組大鼠腎臟組織的結(jié)構(gòu)相關(guān)改變;應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)分析各組大鼠腎臟的p-JNK、Caspase-12蛋白的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)大鼠的一般情況說明造模成功后的糖尿病大鼠不活躍,鼠毛粗糙扎手且缺乏亮度,甚至出現(xiàn)脫毛,大鼠尿量增多,換墊料的次數(shù)較正常組明顯增多,墊料的氣味較正常組難聞且濕度重。正常組大鼠,精神飽滿、活躍、體重增加。實(shí)驗(yàn)至結(jié)束,30只大鼠中共25只順利的完成實(shí)驗(yàn)即糖尿病對(duì)照組7只,其余三組各6只。死亡的5只,原因可能與高血糖引發(fā)的并發(fā)癥相關(guān)。2.藥物干預(yù)8周結(jié)束時(shí)各組大鼠體重、空腹血糖(1)體重變化:與NC組大鼠體重(477.17±23.82g)相比,DMC組大鼠體重(396.51±9.15g)下降(P0.05)。和DMC組大鼠體重相比,LIR-L組(440.02±34.22g)、LIR-H組(434.67±39.42)兩組大鼠的體重均升高(P0.05)。LIR-L組和LIR-H組兩者間體重比較,變化無差異(P0.05)。(2)空腹血糖變化:與NC組大鼠FBG(4.58±0.69mmol/L)相比,DMC組FBG(22.57±1.42mmol/L)升高(P0.05)。與DMC組相比,LIR-L組(19.43±1.07mmol/L)、LIR-H組(17.32±1.02mmol/L)的FBG都下降(P0.05)。LIR-L組和LIR-H組比較,LIR-H組FBG水平下降(P0.05)。3.實(shí)驗(yàn)干預(yù)結(jié)束后四組大鼠生化指標(biāo)(1)血生化指標(biāo):與NC組相比,DMC組的總膽固醇、血肌酐、尿素氮、空腹胰島素指標(biāo)上升(P0.05),而甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇指標(biāo)無差異(P0.05)。與DMC組大鼠比,LIR-L組、LIR-H組的總膽固醇、血肌酐、尿素氮、空腹胰島素指標(biāo)均下降(P0.05),而甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白膽固醇指標(biāo)均無差異(P0.05)。LIR-H組大鼠的血肌酐、尿素氮、空腹胰島素指標(biāo)較LIR-L組下降(P0.05),而LIR-H組四個(gè)血脂指標(biāo)與LIR-L組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)尿液檢查指標(biāo):與NC組比,DMC組大鼠的24小時(shí)尿蛋白、尿微量白蛋白、尿微量白蛋白/尿肌酐指標(biāo)均上升(P0.05)。與DMC組大鼠相比,LIR-L組、LIR-H組的這三個(gè)指標(biāo)均下降(P0.05)。而LIR-H組這三個(gè)指標(biāo)與LIR-L組相比均下降(P0.05)。4.各組大鼠腎臟的病理改變HE常規(guī)與PAS特殊染色切片顯微鏡觀察情況為:NC組腎組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)基本正常,DMC組大鼠的腎小球變大、結(jié)構(gòu)亂,系膜外的基質(zhì)增多,基底膜變厚;與DMC組比較,LIR-L組、LIR-H組的大鼠腎病理變化減輕。5.免疫組織化學(xué)檢測p-JNK、Caspase-12蛋白在腎臟的表達(dá)及相對(duì)定量結(jié)果根據(jù)免疫組化試劑說明書:棕褐色區(qū)域?yàn)殛栃员磉_(dá)區(qū)。光鏡下觀察到p-JNK蛋白在腎小球比腎小管表達(dá)多;而Caspase-12蛋白在腎小管表達(dá)多,部分腎小球中也可見有表達(dá),表達(dá)量相對(duì)少。NC組中p-JNK、Caspase-12在腎小球和腎小管中表達(dá)均少;DMC組的p-JNK、Caspase-12蛋白在腎臟表達(dá)較NC組明顯增多(P0.05);而通過利拉魯肽干預(yù)后,LIR-L、LIR-H組的上述兩種蛋白在腎臟表達(dá)較DMC組均下降(P0.05);但LIR-L組與LIR-H組的上述兩種蛋白在腎臟表達(dá)無差異(P0.05)。結(jié)論:1.DMC組大鼠腎臟的p-JNK、Caspase-12蛋白表達(dá)明顯增加,證實(shí)T2D大鼠腎臟中存在ERS的激活。2.利拉魯肽能減少T2D大鼠腎臟的p-JNK、Caspase-12蛋白表達(dá),同時(shí)緩解腎功能的惡化,提示利拉魯肽可能通過抑制ERS起到保護(hù)腎臟的作用。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R965;R-332
【部分圖文】：

圖 1 各組大鼠體重、空腹血糖比較注：正常對(duì)照組（NC 組）、糖尿病對(duì)照組（DMC 組）、利拉魯肽 100ug/kg 干預(yù)組（LIR-L 利拉魯肽 200ug/kg 干預(yù)組（LIR-H 組）。aP<0.05 和 NC 組比較；bP<0.05 和 DMC 組比較；cP<和 LIR-L 組比較。

12圖 2 各組大鼠生化指標(biāo)注：正常對(duì)照組（NC 組,n=6）、糖尿病對(duì)照組（DMC 組,n=7）、利拉魯肽 100ug/kg 干預(yù)組（LIR-L組,n=6）、利拉魯肽 200ug/kg 干預(yù)組（LIR-H 組,n=6）�？偰懝檀迹═C）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。aP<0.05 和 NC 組比較；bP<0.05 和 DMC 組比較；cP<0.05 和 LIR-L 組比較。2.4 各組大鼠腎臟組織病理改變HE 常規(guī)與 PAS 特殊染色切片觀察情況為:NC 組大鼠腎組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)基本正常，DMC 組大鼠的腎小球變大、結(jié)構(gòu)亂，系膜外的基質(zhì)增多，基底膜增厚明顯；與DMC 組比較，LIR-L 組、LIR-H 組的大鼠腎病理變化減輕。圖 3-1、3-2。

大鼠腎臟組織HE染色（40倍）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2828455