目的:本研究構(gòu)建肥胖大鼠動(dòng)物模型,通過(guò)檢測(cè)睪丸及睪周脂肪組織中鋅相關(guān)蛋白(PRDM16,ZBTB32以及ZAG)的表達(dá)及定位,旨在探討鋅相關(guān)蛋白在肥胖雄性大鼠生殖中的價(jià)值。方法:從河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)買清潔級(jí)雄性SD大鼠20只,平均體重為(103±11)g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,將20只SD雄性大鼠隨機(jī)分成正常組6只和肥胖組14只;其中正常組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng),肥胖組給予高脂飼料喂養(yǎng)。每周同一時(shí)間對(duì)大鼠體重進(jìn)行測(cè)量。第12周末時(shí),以肥胖組大鼠體質(zhì)量大于正常組平均體質(zhì)量的20%為肥胖模型構(gòu)建成功。最終成功構(gòu)建肥胖大鼠模型7只。取大鼠雙側(cè)睪丸及睪周脂肪組織稱重,同時(shí)取新鮮大鼠附睪尾部檢測(cè)精子濃度及活力;采用HE染色和免疫組織化學(xué)法觀察肥胖對(duì)睪丸組織形態(tài)學(xué)影響以及PRDM16、ZBTB32和ZAG在睪丸組織中的定位;Western Blot檢測(cè)PRDM16、ZBTB32以及ZAG在大鼠睪丸及睪周脂肪中蛋白表達(dá);熒光定量PCR檢測(cè)PRDM16、ZBTB32和ZAG在大鼠睪丸及睪周脂肪中mRNA表達(dá)。結(jié)果:1.正常組和肥胖組大鼠精液參數(shù)分析通過(guò)對(duì)兩組大鼠的精液參數(shù)進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)肥胖組大鼠精子濃度和活力顯著低于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.正常組和肥胖組大鼠睪丸形態(tài)學(xué)變化HE染色結(jié)果顯示,睪丸生精小管由多層不同發(fā)育階段的生精細(xì)胞組成,正常組大鼠睪丸生精小管排列整齊,管腔內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞層次清楚,結(jié)構(gòu)完整,管腔內(nèi)可見(jiàn)大量精子;而肥胖組大鼠睪丸生精小管排列疏松,間質(zhì)變寬,睪丸生精上皮結(jié)構(gòu)不完整,生精細(xì)胞層數(shù)減少,且出現(xiàn)空泡樣改變,管腔內(nèi)精子數(shù)量減少。3.PRDM16、ZBTB32和ZAG在睪丸組織中的定位免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,PRDM16、ZBTB32和ZAG主要表達(dá)于大鼠睪丸生精細(xì)胞胞質(zhì)中,且PRDM16在肥胖大鼠睪丸組織中的表達(dá)顯著低于正常組,而ZBTB32和ZAG在兩組大鼠睪丸組織表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.PRDM16、ZBTB32和ZAG在兩組大鼠睪丸及睪周脂肪中mRNA表達(dá)熒光定量PCR結(jié)果顯示,PRDM16在肥胖組大鼠睪丸及睪周脂肪中mRNA的表達(dá)顯著降低;ZAG在肥胖大鼠睪周脂肪中mRNA表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),ZAG在肥胖大鼠睪丸組織中mRNA的表達(dá)與正常組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);ZBTB32在正常組和肥胖組大鼠睪丸及睪周脂肪中mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.PRDM16、ZBTB32和ZAG在兩組大鼠睪丸及睪周脂肪中蛋白表達(dá)Western Blot結(jié)果顯示,與正常組大鼠相比,肥胖組大鼠睪丸及睪周脂肪中PRDM16蛋白表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);肥胖組大鼠睪周脂肪中ZAG蛋白表達(dá)顯著低于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而肥胖組大鼠睪丸組織ZAG的蛋白表達(dá)與正常大鼠相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),ZBTB32的蛋白表達(dá)在兩組大鼠睪丸及睪周脂肪中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.與正常組大鼠相比,肥胖組大鼠睪丸組織形態(tài)被明顯破壞,精子濃度和精子活力顯著降低,提示肥胖對(duì)雄性生殖具有明顯的影響。2.鋅相關(guān)蛋白PRDM16、ZBTB32和ZAG主要表達(dá)于大鼠生精細(xì)胞胞質(zhì)中;PRDM16在肥胖大鼠睪丸及睪周脂肪中mRNA和蛋白表達(dá)均顯著低于正常組;肥胖大鼠睪周脂肪中ZAG mRNA和蛋白表達(dá)與正常組相比顯著降低,提示肥胖可能導(dǎo)致鋅相關(guān)蛋白表達(dá)異常,影響雄性大鼠生殖。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R589.2;R-332
【部分圖文】：

正常組和肥胖組大鼠睪丸HE染色Fig.1HEstainingoftestistissuemorphologyinnormalandobeserats.A：CD

免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常組和肥胖組大鼠睪丸PRDM16的表達(dá)（IHC,×100）

免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常組和肥胖組大鼠睪丸ZBTB32表達(dá)（IHC,×100）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2827007