目的:探究迷走神經(jīng)電刺激在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導的急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)模型小鼠中的作用及其相關機制。方法:(1)選擇SPF級雄性C57BL/6小鼠,氣管內(nèi)滴注LPS(3mg/kg)建立小鼠ARDS模型。分離并切除小鼠頸部右側(cè)迷走神經(jīng),使用不同強度的電壓(5V,10V)刺激ARDS小鼠,于氣管內(nèi)給藥后的4h取材,觀察迷走神經(jīng)電刺激能否減輕LPS誘導的炎癥性肺損傷。(2)為探究α7煙堿型乙酰膽堿受體(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)在其中的作用,在體內(nèi),經(jīng)腹腔注射不同劑量的α7nAChR激動劑PNU-282987(1mg/kg,10mg/kg)30min后,氣管內(nèi)滴入LPS(3mg/kg),每組小鼠分為兩批,分別于4h及24h后取肺組織做HE染色,觀察小鼠肺組織病理學改變并提取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)檢測總蛋白濃度和炎癥因子的表達。在體外,選取小鼠肺泡巨噬細胞系MH-S為實驗對象,采用LPS(100ng/ml)刺激MH-S細胞建立炎癥反應模型。ELISA檢測不同濃度(0-1000μM)的α7nAChR激動劑PNU-282987預處理30min后給予LPS作用4h的IL-6表達情況。(3)為了探究PNU-282987對STAT3磷酸化水平的影響,Western Blotting檢測經(jīng)PNU-282987處理不同時間(0h,1h,2h,3h,4h)后的p-STAT3表達情況。選取最佳時間點,檢測不同濃度的PNU-282987(0-1000μM)對LPS誘導的p-STAT3表達的影響。結(jié)果:(1)與模型組相比,低電壓(5V)刺激迷走神經(jīng)可有效地改善肺組織損傷的程度,減輕炎癥細胞的浸潤,同時降低BALF中TNF-α、IL-6及總蛋白的濃度。(2)在體內(nèi),低劑量(1mg/kg)的PNU-282987在氣管內(nèi)滴注LPS后的24h能提高小鼠的肺泡完整性,同時抑制炎癥細胞的聚集,下調(diào)BALF中的濃度和促炎細胞因子TNF-α、IL-6的表達。在體外,PNU-282987呈劑量依賴性地降低LPS誘導的炎癥因子IL-6的表達。(3)給予PNU-282987后的1h細胞中p-STAT3的表達受到抑制,且2h開始降低得明顯。同時,PNU-282987呈劑量依賴性地抑制LPS誘導的p-STAT3的表達。結(jié)論:迷走神經(jīng)電刺激通過α7nAChR抑制STAT3的磷酸化降低炎癥反應,減輕LPS誘導的ARDS模型小鼠的肺損傷。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R563.8;R-332
【部分圖文】：

華 中 科 技 大 學 碩 士 學 位 論 文20圖1. 不同電壓強度的迷走神經(jīng)電刺激對小鼠組織病理學改變及肺損傷評分的影響（×200）。A. Sham 組；B. LPS 組；C. VNS(5V)+LPS 組；D. VNS(10V)+LPS 組；E. 各組的肺損傷評分。與 Sham 組比較，***P<0.001；與 LPS 組比較，#P<0.05。2. 迷走神經(jīng)電刺激對 LPS 誘導的 ARDS 模型小鼠 BALF 中的 TNF-α、IL-6 及總蛋白表達的影響如圖 2 所示，與假手術組相比，氣管內(nèi)滴注 LPS 后小鼠 BALF 中的 TNF-α、IL-6、總蛋白的表達明顯增加（P<0.001）。與 LPS 組相比，低電壓（5V）迷走

華 中 科 技 大 學 碩 士 學 位 論 文神經(jīng)電刺激組小鼠的 BALF 中 TNF-α、IL-6 的濃度均明顯降低（P<0.01）。但高電壓（10V）迷走神經(jīng)電刺激組的小鼠，其 BALF 中的 TNF-α、IL-6 的表達略微地降低，但并無統(tǒng)計學意義。低電壓和高電壓迷走神經(jīng)電刺激組的小鼠 BALF總蛋白濃度均較 LPS 組的小鼠要低（P<0.05）。

22同劑量的 PNU-282987 對小鼠組織病理學改變及肺損傷評分的影響（4h）（×20 組；B. LPS 組；C. PNU(1)+LPS 組；D. PNU(10)+LPS 組；E. 各組的肺損傷評與 Sham 組比較，***P<0.001；與 LPS 組比較，#P<0.05。nAChR 激動劑 PNU-282987 對 LPS 誘導 ARDS 模型小鼠肺組織病理及肺損傷評分的影響（24h）圖 4 所示，假手術組的小鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡壁較薄，肺泡腔內(nèi)無的滲出。模型組的肺泡結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)大面積地破壞，肺泡排列不規(guī)整，肺明顯，肺間質(zhì)充血水腫，存在大量的炎癥細胞浸潤和纖維蛋白的滲出

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本文編號：2815081