目的:研究去分化間充質干細胞(de-differentiated mesenchymal stem cells,De-MSCs)成骨再分化能力。方法:以MSCs為對照,分別采用Cell Count Kit(CCK8)法、實時定量PCR(qPCR)、堿性磷酸酶(ALP)活性和茜素紅染色法檢測De-MSCs增殖能力、成骨相關基因、成骨再分化能力等。結果:De-MSCs可表達干細胞表面標志,在成骨培養(yǎng)基中增殖能力高于MSCs(P0.05),成骨相關基因(Runx2、Osterix、Bmp2)表達明顯增加(P0.05),ALP活性檢測發(fā)現De-MSCs明顯高于MSCs組(P0.05),28 d后茜素紅染色可見紅色結節(jié)。結論:De-MSCs具備某些MSCs特征,但是體外再次成骨效率明顯提高,De-MSCs可作為更優(yōu)質種子細胞,為再生醫(yī)學開拓新的思路。
【部分圖文】：

南京醫(yī)科大學學報第33卷第8期南報2013年8月將MSCs與De-MSCs兩組細胞同時成骨誘導7d后檢測成骨相關基因，發(fā)現以MSCs為對照，De-MSCs再成骨后基因表達明顯高于MSCs成骨，Runx2表達增加約3倍，BMP2增加約4．5倍，Os-terix增加約14倍（P＜0．01，圖4），表明De-MSCs有更強的成骨分化潛能，成骨分化效率更高，誘導后的成骨基因表達比未誘導狀態(tài)更加明顯。2．5ALP活性檢測ALP是成骨細胞活動產物，濃度值正相關于成骨能力，是反映成骨能力敏感指標。De-MSCs與MSCs同時成骨誘導14d，分別記為MSC-obs和De-MSC-obs。收集上清檢測ALP濃度值，結果顯示De-MSC-obs顯著高于MSC-obs（MSC-obs組0．58±0．015，De-MSC-obs組0．720±0．006，P＜0．01），說明De-MSCs成骨分化能力較MSCs更強（圖5）。MSCsMSCs-obsDe-MSCs圖1光鏡下觀察MSCs、MSCs-obs及De-MSCs形態(tài)（×50）Figure1ThemorphologyofMSCs，MSC-obsandDe-MSCs（×50）CD34CD105CD29CD45HLA-DR圖2流式細胞儀檢測De-MSCs表達部分MSCs表面標志Figure2ThesurfacemarkersofDe-MSCsdetectedbyFACS與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝5）。圖3CCK8檢測De-MSCs細胞增殖能力增強Figure3ProliferationpotentialofDe-MSCsincreaseddetectedbyCCK83210D（450nm）1d3d5d7d時間********MSCDe-MSC20151050相對表達量******MSCDe-MSCRunx2BMP2Osterix與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝3）。圖4qPCR檢測De-MSCs再次成骨誘導后相關基因表達高于MSCsFigure4Theosteogenicrelated-geneexpressionsofDe-MSCswerehigherthanMSCsdetectedbyqPCR·1046·

南京醫(yī)科大學學報第33卷第8期南報2013年8月將MSCs與De-MSCs兩組細胞同時成骨誘導7d后檢測成骨相關基因，發(fā)現以MSCs為對照，De-MSCs再成骨后基因表達明顯高于MSCs成骨，Runx2表達增加約3倍，BMP2增加約4．5倍，Os-terix增加約14倍（P＜0．01，圖4），表明De-MSCs有更強的成骨分化潛能，成骨分化效率更高，誘導后的成骨基因表達比未誘導狀態(tài)更加明顯。2．5ALP活性檢測ALP是成骨細胞活動產物，濃度值正相關于成骨能力，是反映成骨能力敏感指標。De-MSCs與MSCs同時成骨誘導14d，分別記為MSC-obs和De-MSC-obs。收集上清檢測ALP濃度值，結果顯示De-MSC-obs顯著高于MSC-obs（MSC-obs組0．58±0．015，De-MSC-obs組0．720±0．006，P＜0．01），說明De-MSCs成骨分化能力較MSCs更強（圖5）。MSCsMSCs-obsDe-MSCs圖1光鏡下觀察MSCs、MSCs-obs及De-MSCs形態(tài)（×50）Figure1ThemorphologyofMSCs，MSC-obsandDe-MSCs（×50）CD34CD105CD29CD45HLA-DR圖2流式細胞儀檢測De-MSCs表達部分MSCs表面標志Figure2ThesurfacemarkersofDe-MSCsdetectedbyFACS與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝5）。圖3CCK8檢測De-MSCs細胞增殖能力增強Figure3ProliferationpotentialofDe-MSCsincreaseddetectedbyCCK83210D（450nm）1d3d5d7d時間********MSCDe-MSC20151050相對表達量******MSCDe-MSCRunx2BMP2Osterix與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝3）。圖4qPCR檢測De-MSCs再次成骨誘導后相關基因表達高于MSCsFigure4Theosteogenicrelated-geneexpressionsofDe-MSCswerehigherthanMSCsdetectedbyqPCR·1046·

南京醫(yī)科大學學報第33卷第8期南報2013年8月將MSCs與De-MSCs兩組細胞同時成骨誘導7d后檢測成骨相關基因，發(fā)現以MSCs為對照，De-MSCs再成骨后基因表達明顯高于MSCs成骨，Runx2表達增加約3倍，BMP2增加約4．5倍，Os-terix增加約14倍（P＜0．01，圖4），表明De-MSCs有更強的成骨分化潛能，成骨分化效率更高，誘導后的成骨基因表達比未誘導狀態(tài)更加明顯。2．5ALP活性檢測ALP是成骨細胞活動產物，濃度值正相關于成骨能力，是反映成骨能力敏感指標。De-MSCs與MSCs同時成骨誘導14d，分別記為MSC-obs和De-MSC-obs。收集上清檢測ALP濃度值，結果顯示De-MSC-obs顯著高于MSC-obs（MSC-obs組0．58±0．015，De-MSC-obs組0．720±0．006，P＜0．01），說明De-MSCs成骨分化能力較MSCs更強（圖5）。MSCsMSCs-obsDe-MSCs圖1光鏡下觀察MSCs、MSCs-obs及De-MSCs形態(tài)（×50）Figure1ThemorphologyofMSCs，MSC-obsandDe-MSCs（×50）CD34CD105CD29CD45HLA-DR圖2流式細胞儀檢測De-MSCs表達部分MSCs表面標志Figure2ThesurfacemarkersofDe-MSCsdetectedbyFACS與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝5）。圖3CCK8檢測De-MSCs細胞增殖能力增強Figure3ProliferationpotentialofDe-MSCsincreaseddetectedbyCCK83210D（450nm）1d3d5d7d時間********MSCDe-MSC20151050相對表達量******MSCDe-MSCRunx2BMP2Osterix與同時間點的MSCs比較，**P＜0．01（n＝3）。圖4qPCR檢測De-MSCs再次成骨誘導后相關基因表達高于MSCsFigure4Theosteogenicrelated-geneexpressionsofDe-MSCswerehigherthanMSCsdetectedbyqPCR·1046·

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