目的:構(gòu)建攜帶mAG-hGeminin-GFP報告質(zhì)粒的人包皮成纖維細(xì)胞系,通過諾考達(dá)唑(Nocodazole)干預(yù),探究Nocodazole對HFF細(xì)胞周期的影響。研究魚藤酮(Rotenone)對HFF細(xì)胞衰老的影響,探究Rotenone促進(jìn)衰老的相關(guān)分子機(jī)制。方法:1、構(gòu)建構(gòu)建mAG-hGeminin-GFP質(zhì)粒,慢病毒包裝,感染293T細(xì)胞,收集293T培養(yǎng)液感染HFF細(xì)胞。2、Thymidine-Nocodazole 順序給藥處理 mAG-hGeminin-GFP-HFF 細(xì)胞,流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞周期的動態(tài)變化。3、不同濃度的Rotenone處理過的HFF細(xì)胞,顯微鏡下觀察各個時間段細(xì)胞的形態(tài)變化,并計數(shù)。4、Western blot分析各組HFF細(xì)胞內(nèi)P21、P16蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:1、成功構(gòu)建攜帶mAG-hGeminin-GFP報告質(zhì)粒的HFF細(xì)胞;2、隨著藥物撤離時間的延長,越多的細(xì)胞被阻滯在G1-S期,GFP+細(xì)胞越來越少,衰老細(xì)胞富集在GFP+處;3、對照組和Rotenone加藥組比較,加藥組細(xì)胞體積增大,核固縮,邊界不清晰,細(xì)胞大量死亡;4、與對照組相比,Rotenone 10 μM給藥組細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.0001),Rotenone 20μM給藥組細(xì)胞數(shù)量顯著遞減(P0.0001),給藥組間相互比較,也有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01);5、與對照組相比,給藥組P16、P21蛋白表達(dá)升高(P0.05)有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:成功建立攜帶mAG-hGeminin-GFP報告質(zhì)粒的HFF細(xì)胞,將細(xì)胞周期的動態(tài)變化可視化,便于更加直觀地理解和觀察。Thymidine-Nocodazole順序給藥會把大部分的HFF細(xì)胞阻滯在G1-S期,導(dǎo)致細(xì)胞衰老。Rotenone可能通過P21/P16信號通路促進(jìn)HFF細(xì)胞衰老。圖[6]表[2]參[59]
【學(xué)位單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R339.38
【部分圖文】：

圖１、流式細(xì)胞技術(shù)檢測Ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ對ＨＦＦ細(xì)胞的周期變化影響逡逑Ａ：釋放Ｏｈ細(xì)胞周期變化；逡逑Ｂ：釋放３ｈ細(xì)胞周期變化：逡逑

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本文編號：2809334