【摘要】：背景:卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一。WHO世界范圍資料統(tǒng)計,在女性生殖道惡性腫瘤中,卵巢癌發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中占第三位,而病死率占首位,嚴重威脅女性生命。由于卵巢深居盆腔,加之體積較小,卵巢癌癥狀在早期常常不具有典型特異性,發(fā)現(xiàn)時約70%患者已為晚期。癌性疼痛是引起癌癥晚期患者的主要痛苦的原因之一,嚴重影響患者的生活質(zhì)量,也越來越受到人們的重視。目前,疼痛生成傳導的機制并不十分清楚,有研究發(fā)現(xiàn)與腫瘤產(chǎn)生的某些物質(zhì)如前列腺素、內(nèi)皮素等物質(zhì)激動其受體引起的一系列反應有關。過去的幾年中,在癌痛的病生機制的研究中,內(nèi)皮素(endothelin,ET)逐漸受到人們的重視。它是由21種氨基酸組成的多肽,廣泛存在于血管內(nèi)皮及各種組織和細胞中,包含三種亞型ET-1、ET-2、ET-3,主要通過與內(nèi)皮素受體(ETR),包括內(nèi)皮素A受體(ETAR)和內(nèi)皮素B受體(ETBR),結(jié)合而發(fā)揮相應的生物學效應。內(nèi)皮素受體是疼痛神經(jīng)信號傳導的一個信號通路,內(nèi)皮素受體可以選擇性地刺激與神經(jīng)病理性或致癌性疼痛相關的炎癥介質(zhì),可能會引發(fā)人類和其他動物的疼痛狀態(tài)。文獻表明,ETAR主要分布于外周感覺神經(jīng)元上;而在背根神經(jīng)節(jié)以及坐骨神經(jīng)中的紹萬細胞上,主要有ETBR表達,同時ETBR也表達在分泌阿片類物質(zhì)的角質(zhì)形成細胞上。背根神經(jīng)節(jié)(DRG)是機體各種信息以及一些傷害性刺激從外周傳遞到中樞的樞紐,其變化會引起神經(jīng)損傷性痛覺過敏。本文旨在研究卵巢癌癌痛動物模型在內(nèi)皮素及其受體的干預下背根神經(jīng)節(jié)超微結(jié)構(gòu)水平的變化,以期在形態(tài)學上進一步揭示卵巢癌癌痛發(fā)生和傳導的機制。目的:通過建立卵巢癌癌痛動物模型,觀察內(nèi)皮素、內(nèi)皮素受體激動劑及內(nèi)皮素受體拮抗劑對小鼠行為學的影響,以及從超微結(jié)構(gòu)水平觀察小鼠背根神經(jīng)節(jié)在以上不同情況下的損傷情況,為內(nèi)皮素、內(nèi)皮素受體激動劑及內(nèi)皮素受體拮抗劑對卵巢癌癌痛的影響機制提供形態(tài)學依據(jù),從而為卵巢癌癌痛的治療提供新的思路。1.未交配的健康雌性昆明小鼠60只(河北醫(yī)科大學實驗動物中心),年齡5周,約25克。按隨機數(shù)字表法分為正常對照組、假手術組、模型組、模型ET干預組、模型BQ123干預組、模型BQ788干預組,每組10只。采用背側(cè)入路法,在小鼠左側(cè)卵巢接種腹水腫瘤S180腫瘤細胞,建立卵巢癌原位移植小鼠模型。模型ET干預組、模型BQ123干預組和模型BQ788干預組術后第8天、第10天、第12天分別椎管內(nèi)注射內(nèi)皮素ET-1、ETA受體拮抗劑BQ123、ETB受體拮抗劑BQ788,一天一次。2.應用Von-Frey纖維機械刺激器及BME-410A型熱痛刺激儀于造模前一天(第0天)、造模后第7天、第9天(即用藥后第1天)、第11天(即用藥后第3天)、第13天(即用藥后第5天)測定不同分組小鼠左右側(cè)后足機械縮足反射閾值(MWT)及熱縮足潛伏期。3.于第13天處死小鼠,從小鼠頸部垂直剪開椎板,使脊髓完全暴露。末梢肋骨是第一腰椎的征象。第一腰椎背根神經(jīng)節(jié)位于椎間孔,于該處取材第一腰椎背根神經(jīng)節(jié),生理鹽水沖洗后,迅速放于固定液中,置于4℃保存,制作電鏡切片,觀察不同組別小鼠腰段背跟神經(jīng)節(jié)(感覺神經(jīng)元聚集)的電鏡表現(xiàn)。結(jié)果:行為學實驗數(shù)據(jù)結(jié)果顯示1.正常對照組和假手術組無差異。模型對照組小鼠較假手術組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值均降低,疼痛與腫瘤的產(chǎn)生明顯相關。2.模型干預組與模型對照組相比較:模型ET干預組較模型對照組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值顯著下降;模型BQ123干預組較模型對照組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值均升高,但未達到正常對照組水平;模型BQ788干預組較模型對照組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值均升高,但未到達BQ123干預組的水平。內(nèi)皮素與卵巢癌癌痛程度關系密切。3.模型干預ET干預組三組之間均有差異。模型ET干預組較模型BQ123干預組、BQ788干預組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值均降低;模型BQ123干預組較模型BQ788干預組小鼠熱痛敏和機械痛敏閾值均升高。不同內(nèi)皮素受體拮抗劑對卵巢癌癌痛的影響程度不同。電鏡結(jié)果顯示1.正常對照組和假手術組無明顯差異。細胞質(zhì)內(nèi)可見溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),細胞核中可見一個核仁。周邊可見髓鞘致密。2.模型組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)�？梢姾四で雄E,胞漿內(nèi)線粒體變暗,膠質(zhì)細胞,組織水腫,溶酶體增多,部分線粒體空泡變。3.ET-1組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)�？梢娙苊阁w增多,核膜切跡、消失,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)固縮、空泡變,線粒體增多、空泡變、嵴腫脹消失。4.123組表現(xiàn)輕于模型組。背根神經(jīng)節(jié)細胞細胞溶酶體輕微增多,膠質(zhì)細胞呈偽足狀包裹節(jié)細胞,線粒體增多變形。5.788組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)輕于模型組。線粒體彌漫空泡變,嵴消失,核不規(guī)則,溶酶體增多,髓鞘輕度水腫,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正常。結(jié)論:1.內(nèi)皮素及其受體參與卵巢癌癌痛的傳導,不同內(nèi)皮素受體拮抗劑對癌痛的影響程度不同。2.電鏡下觀察卵巢癌和ET-1對小鼠背根神經(jīng)節(jié)細胞均有損傷作用,內(nèi)皮素受體阻斷劑BQ123、BQ788可以減輕這種損傷作用。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.31;R-332
【圖文】：

表 1 機械縮足反射閾值(g) (均數(shù) ±標準差，n=10)Table 1 The mechanical withdrawal threshold(g) (x±s,n=10)造模前 1 天 造模后第7天 造模后第 9 天 造模后第 11 天 造模后第 常對照組 14.38±0.28 14.23±0.33 14.30±0.35 14.15±0.28 14.25±0.33手術組 14.33±0.32 14.31±0.36 14.30±0.29 14.24±0.28 14.27±0.37模型組 14.23±0.28 9.82±0.33* 9.66±0.23* 9.56±0.19* 9.56±0.16* 干預組 14.32±0.40 9.80±0.19 8.25±0.18* 8.56±0.25* 8.38±0.22*123 干預組14.42±0.33 9.64±0.18 12.22±0.19 12.55±0.24 12.25±0.19788 干預組14.34±0.32 9.82±0.35 10.92±0.35 10.89±0.32 10.92±0.30ote: Repeated measurement design analysis for intragroup and intergroup compar standard a=0.05,*為P＜0.05.

Table 2 The thermal withdrawal latency(s) ( x±s,n=10)造模前 1 天造模后第 7天造模后第9天 造模后第11天 造模后第 常對照組 17.62±0.47 17.23±0.36 17.45±0.36 16.98±0.68 17.2±0.30手術組 17.48±0.45 17.28±0.37 17.46±0.38 17.12±0.35 17.25±0.40模型組 17.35±0.52 12.97±0.45* 13.06±0.36* 12.82±0.34* 13.01±0.30* 干預組 17.46±0.69 12.54±0.53 11.56±0.25* 11.7±0.22* 11.6±0.23*123 干預組17.79±0.38 12.61±0.36 14.37±0.23 13.46±0.25 13.55±0.17788 干預組17.18±0.94 12.70±0.40 13.62±0.31 13.22±0.37 13.36±0.18: Repeated measurement design analysis for intragroup and intergroup compatandard a=0.05, *為P＜0.05.

圖 3 正常對照組背根神經(jīng)節(jié)（X3000）Fig.3 Large cells of dorsal root ganglion（normal group）2. 假手術組可在背根神經(jīng)節(jié)細胞質(zhì)內(nèi)見溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細胞核中可見一個核仁。周邊可見髓鞘致密。（見 Fig.4）

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 李青;汪艷;朱慧芬;張曦;胡引男;儲芳芳;;內(nèi)皮素-1促進CD133~+卵巢腫瘤干細胞血管新生的機制研究[J];腫瘤學雜志;2013年02期

2 楊麟 ,戴德哉;內(nèi)皮素受體拮抗劑將成為腫瘤治療中的新型藥物[J];中國處方藥;2005年05期

本文編號：2802568