【摘要】：背景:卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。WHO世界范圍資料統(tǒng)計(jì),在女性生殖道惡性腫瘤中,卵巢癌發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中占第三位,而病死率占首位,嚴(yán)重威脅女性生命。由于卵巢深居盆腔,加之體積較小,卵巢癌癥狀在早期常常不具有典型特異性,發(fā)現(xiàn)時(shí)約70%患者已為晚期。癌性疼痛是引起癌癥晚期患者的主要痛苦的原因之一,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,也越來(lái)越受到人們的重視。目前,疼痛生成傳導(dǎo)的機(jī)制并不十分清楚,有研究發(fā)現(xiàn)與腫瘤產(chǎn)生的某些物質(zhì)如前列腺素、內(nèi)皮素等物質(zhì)激動(dòng)其受體引起的一系列反應(yīng)有關(guān)。過(guò)去的幾年中,在癌痛的病生機(jī)制的研究中,內(nèi)皮素(endothelin,ET)逐漸受到人們的重視。它是由21種氨基酸組成的多肽,廣泛存在于血管內(nèi)皮及各種組織和細(xì)胞中,包含三種亞型ET-1、ET-2、ET-3,主要通過(guò)與內(nèi)皮素受體(ETR),包括內(nèi)皮素A受體(ETAR)和內(nèi)皮素B受體(ETBR),結(jié)合而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。內(nèi)皮素受體是疼痛神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)的一個(gè)信號(hào)通路,內(nèi)皮素受體可以選擇性地刺激與神經(jīng)病理性或致癌性疼痛相關(guān)的炎癥介質(zhì),可能會(huì)引發(fā)人類和其他動(dòng)物的疼痛狀態(tài)。文獻(xiàn)表明,ETAR主要分布于外周感覺(jué)神經(jīng)元上;而在背根神經(jīng)節(jié)以及坐骨神經(jīng)中的紹萬(wàn)細(xì)胞上,主要有ETBR表達(dá),同時(shí)ETBR也表達(dá)在分泌阿片類物質(zhì)的角質(zhì)形成細(xì)胞上。背根神經(jīng)節(jié)(DRG)是機(jī)體各種信息以及一些傷害性刺激從外周傳遞到中樞的樞紐,其變化會(huì)引起神經(jīng)損傷性痛覺(jué)過(guò)敏。本文旨在研究卵巢癌癌痛動(dòng)物模型在內(nèi)皮素及其受體的干預(yù)下背根神經(jīng)節(jié)超微結(jié)構(gòu)水平的變化,以期在形態(tài)學(xué)上進(jìn)一步揭示卵巢癌癌痛發(fā)生和傳導(dǎo)的機(jī)制。目的:通過(guò)建立卵巢癌癌痛動(dòng)物模型,觀察內(nèi)皮素、內(nèi)皮素受體激動(dòng)劑及內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)小鼠行為學(xué)的影響,以及從超微結(jié)構(gòu)水平觀察小鼠背根神經(jīng)節(jié)在以上不同情況下的損傷情況,為內(nèi)皮素、內(nèi)皮素受體激動(dòng)劑及內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)卵巢癌癌痛的影響機(jī)制提供形態(tài)學(xué)依據(jù),從而為卵巢癌癌痛的治療提供新的思路。1.未交配的健康雌性昆明小鼠60只(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),年齡5周,約25克。按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、模型ET干預(yù)組、模型BQ123干預(yù)組、模型BQ788干預(yù)組,每組10只。采用背側(cè)入路法,在小鼠左側(cè)卵巢接種腹水腫瘤S180腫瘤細(xì)胞,建立卵巢癌原位移植小鼠模型。模型ET干預(yù)組、模型BQ123干預(yù)組和模型BQ788干預(yù)組術(shù)后第8天、第10天、第12天分別椎管內(nèi)注射內(nèi)皮素ET-1、ETA受體拮抗劑BQ123、ETB受體拮抗劑BQ788,一天一次。2.應(yīng)用Von-Frey纖維機(jī)械刺激器及BME-410A型熱痛刺激儀于造模前一天(第0天)、造模后第7天、第9天(即用藥后第1天)、第11天(即用藥后第3天)、第13天(即用藥后第5天)測(cè)定不同分組小鼠左右側(cè)后足機(jī)械縮足反射閾值(MWT)及熱縮足潛伏期。3.于第13天處死小鼠,從小鼠頸部垂直剪開椎板,使脊髓完全暴露。末梢肋骨是第一腰椎的征象。第一腰椎背根神經(jīng)節(jié)位于椎間孔,于該處取材第一腰椎背根神經(jīng)節(jié),生理鹽水沖洗后,迅速放于固定液中,置于4℃保存,制作電鏡切片,觀察不同組別小鼠腰段背跟神經(jīng)節(jié)(感覺(jué)神經(jīng)元聚集)的電鏡表現(xiàn)。結(jié)果:行為學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果顯示1.正常對(duì)照組和假手術(shù)組無(wú)差異。模型對(duì)照組小鼠較假手術(shù)組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值均降低,疼痛與腫瘤的產(chǎn)生明顯相關(guān)。2.模型干預(yù)組與模型對(duì)照組相比較:模型ET干預(yù)組較模型對(duì)照組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值顯著下降;模型BQ123干預(yù)組較模型對(duì)照組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值均升高,但未達(dá)到正常對(duì)照組水平;模型BQ788干預(yù)組較模型對(duì)照組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值均升高,但未到達(dá)BQ123干預(yù)組的水平。內(nèi)皮素與卵巢癌癌痛程度關(guān)系密切。3.模型干預(yù)ET干預(yù)組三組之間均有差異。模型ET干預(yù)組較模型BQ123干預(yù)組、BQ788干預(yù)組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值均降低;模型BQ123干預(yù)組較模型BQ788干預(yù)組小鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏閾值均升高。不同內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)卵巢癌癌痛的影響程度不同。電鏡結(jié)果顯示1.正常對(duì)照組和假手術(shù)組無(wú)明顯差異。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),細(xì)胞核中可見(jiàn)一個(gè)核仁。周邊可見(jiàn)髓鞘致密。2.模型組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)�？梢�(jiàn)核膜切跡,胞漿內(nèi)線粒體變暗,膠質(zhì)細(xì)胞,組織水腫,溶酶體增多,部分線粒體空泡變。3.ET-1組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)�？梢�(jiàn)溶酶體增多,核膜切跡、消失,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)固縮、空泡變,線粒體增多、空泡變、嵴腫脹消失。4.123組表現(xiàn)輕于模型組。背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞溶酶體輕微增多,膠質(zhì)細(xì)胞呈偽足狀包裹節(jié)細(xì)胞,線粒體增多變形。5.788組出現(xiàn)破壞表現(xiàn)輕于模型組。線粒體彌漫空泡變,嵴消失,核不規(guī)則,溶酶體增多,髓鞘輕度水腫,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正常。結(jié)論:1.內(nèi)皮素及其受體參與卵巢癌癌痛的傳導(dǎo),不同內(nèi)皮素受體拮抗劑對(duì)癌痛的影響程度不同。2.電鏡下觀察卵巢癌和ET-1對(duì)小鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞均有損傷作用,內(nèi)皮素受體阻斷劑BQ123、BQ788可以減輕這種損傷作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.31;R-332
【圖文】：

表 1 機(jī)械縮足反射閾值(g) (均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差，n=10)Table 1 The mechanical withdrawal threshold(g) (x±s,n=10)造模前 1 天 造模后第7天 造模后第 9 天 造模后第 11 天 造模后第 常對(duì)照組 14.38±0.28 14.23±0.33 14.30±0.35 14.15±0.28 14.25±0.33手術(shù)組 14.33±0.32 14.31±0.36 14.30±0.29 14.24±0.28 14.27±0.37模型組 14.23±0.28 9.82±0.33* 9.66±0.23* 9.56±0.19* 9.56±0.16* 干預(yù)組 14.32±0.40 9.80±0.19 8.25±0.18* 8.56±0.25* 8.38±0.22*123 干預(yù)組14.42±0.33 9.64±0.18 12.22±0.19 12.55±0.24 12.25±0.19788 干預(yù)組14.34±0.32 9.82±0.35 10.92±0.35 10.89±0.32 10.92±0.30ote: Repeated measurement design analysis for intragroup and intergroup compar standard a=0.05,*為P＜0.05.

Table 2 The thermal withdrawal latency(s) ( x±s,n=10)造模前 1 天造模后第 7天造模后第9天 造模后第11天 造模后第 常對(duì)照組 17.62±0.47 17.23±0.36 17.45±0.36 16.98±0.68 17.2±0.30手術(shù)組 17.48±0.45 17.28±0.37 17.46±0.38 17.12±0.35 17.25±0.40模型組 17.35±0.52 12.97±0.45* 13.06±0.36* 12.82±0.34* 13.01±0.30* 干預(yù)組 17.46±0.69 12.54±0.53 11.56±0.25* 11.7±0.22* 11.6±0.23*123 干預(yù)組17.79±0.38 12.61±0.36 14.37±0.23 13.46±0.25 13.55±0.17788 干預(yù)組17.18±0.94 12.70±0.40 13.62±0.31 13.22±0.37 13.36±0.18: Repeated measurement design analysis for intragroup and intergroup compatandard a=0.05, *為P＜0.05.

圖 3 正常對(duì)照組背根神經(jīng)節(jié)（X3000）Fig.3 Large cells of dorsal root ganglion（normal group）2. 假手術(shù)組可在背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核中可見(jiàn)一個(gè)核仁。周邊可見(jiàn)髓鞘致密。（見(jiàn) Fig.4）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李青;汪艷;朱慧芬;張曦;胡引男;儲(chǔ)芳芳;;內(nèi)皮素-1促進(jìn)CD133~+卵巢腫瘤干細(xì)胞血管新生的機(jī)制研究[J];腫瘤學(xué)雜志;2013年02期

2 楊麟 ,戴德哉;內(nèi)皮素受體拮抗劑將成為腫瘤治療中的新型藥物[J];中國(guó)處方藥;2005年05期

本文編號(hào)：2802568