【摘要】：研究背景RNA 結(jié)合蛋白 Noval(neuro-oncological ventral antigen 1)是神經(jīng)特異性剪接因子。隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)Noval對腫瘤預(yù)后、能量代謝也有影響,并在脂肪組織也具有較高的表達。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),脂肪來源的間充質(zhì)干細胞(Adipose Tissue-Derived stem cells,ADSCs)成脂分化的過程中NOVA1基因表達升高,敲減NOVA1能夠抑制脂肪分化。本研究將進一步探討在ADSCs成脂分化過程中NOVA1的激活機制及其促進脂肪分化的機制。研究目的1.探討脂肪特異轉(zhuǎn)錄因子對NOVA1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。2.發(fā)現(xiàn)Nova1調(diào)控成脂分化的靶分子。研究方法和結(jié)果1.脂肪特異轉(zhuǎn)錄因子對NOVA1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。方法:雙螢光報告檢測脂肪特異轉(zhuǎn)錄因子對NOVA1啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)檢測 ADSCs 中 PPARy在NOVA1啟動子的富集,實時定量PCR檢測在ADSCs中過表達或激活PPARγ對NOVA1表達的調(diào)控。結(jié)果:PPARγ:RXRa轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物通過識別PPARγ應(yīng)答元件(Peroxisome Prolifertors Responsive Element,PPRE)轉(zhuǎn)錄激活NOVA1啟動子;PPARy在NOVA1啟動子區(qū)PPRE附近有顯著富集;激活或過表達PPARγ后NOVA1的表達升高,PPARγ拮抗劑和抑制態(tài)PPARy能夠逆轉(zhuǎn)NOVA1的表達升高。2.Nova1調(diào)控脂肪分化的靶分子。方法:全轉(zhuǎn)錄組表達譜芯片、生物信息學分析和實時定量PCR篩選出Noval調(diào)控的脂肪特異基因;敲減靶基因并成脂誘導,油紅O和實時定量PCR檢測對脂肪分化的影響;敲減NOVA1的基礎(chǔ)上過表達靶基因,成脂誘導后油紅O和實時定量PCR檢測對脂肪分化的影響。結(jié)果:Noval能影響PPARy下游基因ACSL1、CD36、FASN、PLIN1的表達;敲減CD36、FASN、PLIN1都能抑制脂肪分化;過表達FASN或PLIN1都能夠部分挽救敲減NOVA1對脂肪分化抑制作用。研究結(jié)論1.PPARγ:RXRα轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物促進NOVA1基因的轉(zhuǎn)錄。2.Nova1通過影響FASN、PLIN1基因的表達調(diào)控ADSCs成脂分化。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2
【圖文】：

邐４．實驗結(jié)果逡逑４．１邋ＰＰＡＲＹ：ＲＸＲａ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物對啟動子的轉(zhuǎn)錄激活逡逑通過對ｉＶＯ以７啟動子進行生物信息學分析，我們發(fā)現(xiàn)Ｍ９以７啟動子區(qū)存在逡逑Ｃ／ＥＢＰｓ、ＧＡＴＡｓ、ＳＲＥＢＰｌｃ、ＰＰＡＲｙ、ＲＸＲｃｕ邋ＰＰＡＲｙ：ＲＸＲｃｉ邋等月旨肪特異轉(zhuǎn)錄因子可逡逑能的結(jié)合位點。我們將以／的啟動子區(qū)克隆在ｐＧＬ４．１０質(zhì)粒螢火蟲螢光素酶基逡逑因（Ｉｗｃ和ｒａｓｅ）的上游，構(gòu)建了邋＃０權(quán)７啟動子螢光報告質(zhì)粒——ＮＯＶＡｌ－Ｌｕｃ邋ｉＷｉ逡逑１邋－１邋Ａ）。螢光雙報告檢測脂肪特異轉(zhuǎn)錄因子ＣＥＢＰａ、ＣＥＢＰＰ、ＣＥＢＰＳ、ＧＡＴＡ２、ＧＡＴＡ３、逡逑ＳＲＥＢＰｌｃ、ＰＰＡＲｙ、ＲＸＲａ、ＰＰＡＲｙ：ＲＸＲａ對７ＶＯ⑶啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果逡逑顯示，只有ＰＰＡＲｙ：ＲＸＲａ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物能顯著提高加９以７－Ｚｗｃ的螢火蟲螢光素逡逑酶相對活性。ＰＰＡＲｙ對的螢火蟲螢光素酶相對活性有微弱的促進作用，逡逑而邋ＣＥＢＰａ、ＣＥＢＰｐ、ＣＥＢＰ５、ＧＡＴＡ２、ＧＡＴＡ３、ＳＲＥＢＰｌｃ、ＲＸＲａ邋對邐以７－Ｚｗｃ邋的逡逑螢火蟲螢光素酶相對活性無顯著促進（圖ＭＢ）。由此說明，ＰＰＡＲ＾ＲＸＲｏｔ轉(zhuǎn)錄因逡逑子復(fù)合物對以ｉ啟動子具有轉(zhuǎn)錄激活作用。逡逑

邋Ｐｒｏｍｏ邋ｔｏ－的上游，構(gòu)建成報告基因質(zhì)粒邐ＰＰＲＥ－ｍｉｎｉＰ－Ｌｕｃ邋＞邋ＰＰＲＥｍ－ｍｉｎｉＰ－Ｌｕｃ逡逑（圖１－２Ｂ）。螢光雙報告實驗檢測ＰＰＡＲｙ：ＲＸＲａ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物對ＰＰＲＥ、ＰＰＲＥｍ逡逑的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，結(jié)果顯示ＰＰＡＲＹ：ＲＸＲａ能顯著提高的螢火蟲螢逡逑光素酶相對活性，而對ｚｍ＇ｍ＇Ｐ－Ｚｗｑ／ｅｒａｓｅ、的儢火蟲螢光素酶相對逡逑活性無顯著促進作用（圖１－２Ｄ）。因此證明，ＰＰＡＲＹ：ＲＸＲａ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物可以識逡逑別ＰＰＲＥ激活下游啟動子的轉(zhuǎn)錄。逡逑我們根據(jù)以７啟動子區(qū)設(shè)計了邋４組不同片段序列，每組序列包含不同的啟逡逑動子區(qū)域，以及ＰＰＲＥ的有無。一共８個序列，分別克隆到ｐＧＬ４．１０質(zhì)粒Ｌｗｃｚ／ｅｒａｓｅ逡逑基因上游，構(gòu)建成螢光報告質(zhì)�！樱冢鳎�？Ｓ＆Ｌｗｃ？（圖１－２邋Ｅ）。螢光雙報告檢測逡逑ＰＰＡＲＹ：ＲＸＲ（ｘ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物對切啟動子不同片段的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果顯逡逑示ＰＰＡＲｙＲＸＲａ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物能顯著提高含有ＰＰＲＥ的Ｓ／－Ｌｗｃ、ＳＨｗｃ、Ｓ５－ｉ：ｗｃ、逡逑Ｓ７－ｋｃ的螢火蟲螢光素酶相對活性，缺失ＰＰＲＥ的Ｓ２－Ｌｗｃ、Ｓ４－Ｌｗｃ、Ｓ＜５－Ｌｗｃ逡逑的螢火蟲螢光素酶相對活性無顯著促進（圖１－２Ｅ）。以上結(jié)果說明

ＡＤＳＣｓ中ＰＰＡＲ７能否與７ＶＯ以ｉ啟動子區(qū)特異結(jié)合，我們通過染色質(zhì)免疫共沉淀實逡逑驗和實時定量ＰＣＲ檢測ＰＰＡＲｙ在ＰＰＲＥ附近的富集。在的ＰＰＲＥ附近和逡逑Ｉｎｔｒｏｎｌ，各自設(shè)計ｑＰＣＲ引物（圖１－３Ａ），結(jié)果顯示ＰＰＡＲｙ在ＰＰＲＥ的富集度是其逡逑在ＩＮＴＲＯＮ區(qū)的１９倍；而普通ＩｇＧ在２個區(qū)域的富集度比僅為１．９（圖１－３Ｂ）。由逡逑此說逡逑Ａ逡逑ＰＰＲＥ邐Ｅｘｏｎｌ邐Ｉｎｔｒｏｎｉ逡逑ＮＯＶＡＩｇｅｎｅ邐＾＾＾邐逡逑Ｐｒｉｍｅｒｓ邐Ｐｒｉｍｅｒｓ逡逑Ｂ逡逑＿邋０４１邐■邋ＰＰＲＥ逡逑＾邐Ｔ邐Ｅ３邋Ｉｎｔｒｏｎｉ逡逑！邋°－３＇邋Ｉ逡逑『■W逡逑Ｏｌ邐W邐＊逡逑ｔｏ邐ｍ邐ｉ￣ｉ逡逑０．０」悘——ｇａ，和逡逑圖１－３邋ＰＰＡＲｙ與啟動子區(qū)存在特異結(jié)合逡逑（Ａ）邋７ＶＯ以／基因啟動子區(qū)到第一個內(nèi)含子區(qū)示意圖，綠色長方形代表第一個外顯子，橙色長逡逑方形代表ＰＰＲＥ，黑色長線段代表內(nèi)啟動子區(qū)和內(nèi)核子區(qū)，黑色箭頭代表引物擴增的區(qū)域；（Ｂ）逡逑在成脂誘導４８ｈ的ＡＤＳＣｓ交聯(lián)處理好，使用ＰＰＡＲｙ邋ｍＡｂ或ＩｇＧ進行ＣｈＩＰ實驗，ｑＰＣＲ檢測逡逑ＰＰＡＲｙ在基因組不同區(qū)域的富集；將Ｉｎｐｕｔ的信號作為１，計算每組樣品的相對值；數(shù)值用均值逡逑士標準差（ｍｅａｎ土ＳＤ）表不

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;骨髓間充質(zhì)干細胞成骨與成脂分化的平衡調(diào)控機制研究[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年15期

2 姚薇;張潔;嚴小軍;尚廣彬;;中藥干預(yù)骨髓間充質(zhì)干細胞成骨和成脂分化及其機制的研究進展[J];江西中醫(yī)藥;2019年04期

3 朱曉宇;石軍;;鋅對人骨髓間充質(zhì)干細胞體外增殖和成脂分化的影響[J];廣西醫(yī)學;2018年08期

4 徐宏亮;石柳;李滎娟;徐林;王宸;陳輝;芮云峰;;糖尿病大鼠髕腱來源肌腱干細胞體外成脂分化潛能的實驗研究[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2018年03期

5 王皓沿;海鑫;;白藜蘆醇對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨/成脂分化的影響[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2018年02期

6 楊曉娟;田衛(wèi)東;;成脂分化轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子及其作用機制的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2008年S1期

7 王明仁;吳純標;周曉紅;;骨髓基質(zhì)干細胞成骨-成脂分化及補腎中藥對其影響的研究進展[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2014年10期

8 李新建;齊振熙;李志敏;周李學;段璋;張恩銘;孫偉青;;補腎活血湯含藥血清骨髓間充質(zhì)干細胞成骨-成脂分化的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2016年08期

9 黃月琴;王松波;;骨髓間充質(zhì)干細胞成肌和成脂分化的調(diào)控[J];中國生物化學與分子生物學報;2010年07期

10 張洪躍;周潘宇;汪洋;許碩貴;王秀會;;補骨脂素對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨及成脂分化的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2017年15期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王玉;朱國英;王建平;李旭芳;翟江龍;;輻射對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及向成骨和成脂分化的影響[A];中華醫(yī)學會第七次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 劉麗忠;任茂文;黃凱;;人脂肪來源基質(zhì)細胞原代培養(yǎng)和成脂分化[A];第四屆華東六省一市整形外科學術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 詹淵博;李瑩;林楓;苗楠;劉忠爽;劉昕朋;許文霞;張斌;;阿司匹林對大鼠BMSC成脂分化影響的表觀遺傳機制研究[A];2017全國口腔生物醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2017年

4 鄒玲玲;魯紅云;劉紅;李玲玲;舒曉春;孫遼;謝丹紅;;GLP-1對人脂肪干細胞增殖、成脂分化及脂代謝的影響[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 何小寧;李蓓;金巖;;ALPL通過調(diào)節(jié)L-型鈣離子通道調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨成脂分化平衡[A];2019第九次全國口腔生物醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2019年

6 秦會;潘一帆;鄭璐;周春艷;劉薇;;代表性全氟/多氟化合物對人骨髓間充質(zhì)干細胞分化的干擾作用和機制[A];中國毒理學會第九次全國毒理學大會論文集[C];2019年

7 王平;楊光;李遠棟;吳純標;;榮筋片影響SAMP6鼠成骨-成脂分化關(guān)鍵調(diào)控因子的實驗研究[A];第二十屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學術(shù)研討會、第二屆中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會骨傷科學術(shù)年會、第十九屆浙江省中西醫(yī)結(jié)合骨傷科專業(yè)委員會學術(shù)年會論文匯編[C];2013年

8 徐倩;束剛;朱曉彤;王松波;王麗娜;高萍;習欠云;張永亮;江青艷;;全反式維甲酸對豬骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的影響[A];全國動物生理生化第七屆全國代表大會暨第十三次學術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2014年

9 劉冬梅;趙琳;鄧艷華;趙紅燕;崔斌;劉建民;;二甲雙胍對骨髓基質(zhì)干細胞成骨和成脂分化的影響[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

10 劉冬梅;趙琳;鄧艷華;趙紅燕;崔斌;劉建民;;二甲雙胍對骨髓基質(zhì)干細胞成骨和成脂分化的影響[A];中華醫(yī)學會第三次骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病中青年學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者 白毅;骨髓間充質(zhì)干細胞成骨與成脂分化平衡調(diào)控機制研究獲進展[N];中國醫(yī)藥報;2009年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 林娜;NOVA1在脂肪間充質(zhì)干細胞成脂分化過程中的轉(zhuǎn)錄激活及其作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

2 許振斌;雷尼酸鍶通過干預(yù)細胞自噬水平調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化進程的研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

3 劉保巖;MicroRNA-2861靶向SIRT1通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控成脂分化的研究[D];濟南大學;2019年

4 劉傳國;維生素C抑制ERK1/2磷酸化上調(diào)collagen Ⅵ表達促進3T3-L1前脂肪細胞成脂分化[D];山東師范大學;2017年

5 邱凱;胞內(nèi)鈣離子平衡與骨骼肌前體細胞成肌成脂分化的關(guān)系研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2018年

6 關(guān)龍;牛間充質(zhì)干細胞成肌/成脂分化中差異miRNAs的鑒定及miR-23a調(diào)控機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2017年

7 肖靜;p204在3T3-L1細胞成脂分化過程中的表達及功能研究[D];清華大學;2010年

8 楊曉紅;miR-705對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞分化功能異常的調(diào)控作用[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

9 楊曉紅;miR-705對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞分化功能異常的調(diào)控作用[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

10 史春梅;miR-148a影響人脂肪源性間充質(zhì)干細胞成脂分化的分子機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 朱曉宇;人骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的體外優(yōu)化培養(yǎng)體系研究[D];上海交通大學;2016年

2 張曉萌;MiR-351-5p對前體脂肪細胞3T3-L1成脂分化的影響及作用機制[D];內(nèi)蒙古大學;2019年

3 錢岳鵬;miR-140-5P對應(yīng)力作用下的BMSCs成骨與成脂分化調(diào)控作用的研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

4 張立志;miR-130b調(diào)控人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨和成脂分化平衡的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2018年

5 馮雁婷;miR-326通過靶向調(diào)控C/EBPα的表達影響人脂肪干細胞的成脂分化[D];南方醫(yī)科大學;2018年

6 潘真真;皮下與內(nèi)臟脂肪間充質(zhì)干細胞的增殖及成脂分化差異及相關(guān)分子機制研究[D];山東大學;2018年

7 張玉松;Ror2/Wnt5a信號通路對大鼠牙槽骨骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的影響[D];華北理工大學;2018年

8 張娟娟;miR-20a-5p通過靶向Klf3調(diào)控小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的研究[D];天津醫(yī)科大學;2018年

9 黃煒平;芥子堿調(diào)控miR-330-5p抑制H_2O_2誘導MSCs成脂分化相關(guān)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2018年

10 李可;白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ調(diào)控MicoRNA-466c-5p對BMSCs成脂分化的機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2018年

本文編號：2801778