【摘要】：目的:建立放射性唾液腺損傷的細(xì)胞學(xué)模型,為后期放射性損傷唾液腺的功能修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究打下細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。方法:利用組織塊法與酶消化法從新生3d SD大鼠頜下腺中分離頜下腺細(xì)胞,通過(guò)胰蛋白酶差速脫壁法及傳代純化得到大鼠頜下腺上皮細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)、傳代;對(duì)傳至P2細(xì)胞應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行角蛋白(CK7)鑒定;制備P2代大鼠頜下腺上皮細(xì)胞細(xì)胞懸液,利用醫(yī)用電子直線加速器對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行不同劑量的照射(0Gy、1Gy、3Gy、5Gy、7Gy、9Gy);通過(guò)CCK-8(Cell Counting Kit-8)技術(shù)檢測(cè)各照射劑量組細(xì)胞增殖活性;使用Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)各照射劑量組細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè);通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定各組細(xì)胞72h后上清液中大鼠唾液淀粉酶α1(AMY1)的含量;使用糖原PAS染色法及免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)各組細(xì)胞糖原分泌及E-鈣黏蛋白表達(dá)能力進(jìn)行評(píng)估比較。結(jié)果:1、原代SD大鼠頜下腺上皮細(xì)胞,第6天細(xì)胞鏡下呈多角形,鵝卵石樣排列,第14天細(xì)胞呈鋪路石樣;2、P2代大鼠頜下腺上皮細(xì)胞CK7陽(yáng)性表達(dá),證明細(xì)胞為上皮來(lái)源;3、放射后72h各組細(xì)胞鏡下可見(jiàn)0Gy與1Gy組細(xì)胞無(wú)明顯差異,細(xì)胞形態(tài)均一,細(xì)胞密度約90%;3Gy組細(xì)胞形態(tài)均一,細(xì)胞密度稍降低;5Gy組細(xì)胞密度進(jìn)一步降低,但細(xì)胞形態(tài)尚可;7Gy與9Gy組細(xì)胞異形性大,細(xì)胞密度大幅度下降,其中9Gy組鏡下極少見(jiàn)貼壁活細(xì)胞;4、CCK-8檢測(cè)顯示各組細(xì)胞在1-7天內(nèi)增殖活性均先增加后降低,細(xì)胞的增殖能力隨照射劑量的增加而降低,除0Gy與1Gy組增殖活性無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㧐0.05)外,剩余組間細(xì)胞增殖活性差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),其中5Gy組細(xì)胞增殖活性降至0Gy組的約53.95%;5、各組細(xì)胞流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果可知除0Gy與1Gy組間細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義之外(P0.05),剩余各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中5Gy組細(xì)胞凋亡率明顯升高至12.65±0.72%;6、各組細(xì)胞上清液中AMY1濃度隨照射劑量的增加而減少,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中5Gy組細(xì)胞AMY1濃度降至0Gy組的約59.9%;7、各組細(xì)胞糖原染色結(jié)果見(jiàn)0Gy、1Gy組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均見(jiàn)大量深紅色糖原顆粒,3Gy組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)深紅色糖原顆粒稍減少,5Gy、7Gy兩組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的紅色糖原顆粒明顯減少且染色變淺,而9Gy組胞胞質(zhì)內(nèi)幾乎無(wú)紅色糖原顆粒;8、各組細(xì)胞E-Cad免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果可見(jiàn)0Gy、1Gy組細(xì)胞胞漿呈深棕褐色,3Gy、5Gy組細(xì)胞胞漿棕褐色變淺,7Gy、9Gy組細(xì)胞胞漿內(nèi)極少見(jiàn)棕褐色顆粒。結(jié)論:輻射造成大鼠頜下腺上皮細(xì)胞損傷且隨輻射劑量的增加,細(xì)胞損傷程度加重,而5Gy的X線照射可能為SD大鼠頜下腺上皮細(xì)胞放射性損傷細(xì)胞學(xué)模型合適照射劑量。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R78;R-332
【圖文】：

醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 曹結(jié)果1 SD 大鼠頜下腺細(xì)胞鏡下形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)2天后鏡下可見(jiàn)貼壁的上皮細(xì)胞，第4天鏡下可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞混白酶差速貼壁法去除后可得到形態(tài)均一的 SD 大鼠下頜下腺細(xì)胞，第 6 天鏡胞呈多角形，呈鵝卵石樣排列（見(jiàn)圖 1A）；第 14 天時(shí)鏡下細(xì)胞呈鋪路石樣，可見(jiàn)豐富胞漿及分泌顆粒（見(jiàn)圖 1B）

BBB圖 1.倒置相差顯微鏡下觀察原代 SD 大鼠 SMGCs 形態(tài)A.SD 大鼠 SMGCs 原代培養(yǎng)第 6 天（×200）；B.SD 大鼠 SMGCs 原代培養(yǎng)第 14 天（×400）2 SD 大鼠下頜下腺細(xì)胞免疫學(xué)鑒定本實(shí)驗(yàn)以角蛋白（CK7）作為標(biāo)記蛋白。鏡下表現(xiàn)為下頜下腺細(xì)胞細(xì)胞核及細(xì)呈黃棕色染色（圖 2A），CK7 陽(yáng)性表達(dá)，證實(shí)細(xì)胞為上皮來(lái)源，PBS 液作為陰照組（圖 2B）。A

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 曹 璐2.3 SD 大鼠頜下腺細(xì)胞放射后各組鏡下形態(tài)學(xué)特征第 2 代 SD 大鼠頜下腺細(xì)胞制細(xì)胞懸液，分為 6 組，分別給予 0Gy、1Gy、3Gy、5Gy、7Gy 和 9Gy 的 X 線照射，接種至 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng) 72h 后顯微鏡下觀察，可見(jiàn) 0Gy 組細(xì)胞形態(tài)均一，細(xì)胞密度約 90%（見(jiàn)圖 3A）；1Gy 組鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)與 0Gy組基本相同（見(jiàn)圖 3B）；3Gy 組細(xì)胞形態(tài)較均一，細(xì)胞密度約 80%（見(jiàn)圖 3C）；5Gy組細(xì)胞形態(tài)尚可，細(xì)胞密度進(jìn)一步降低（見(jiàn)圖 3D）；7Gy 組細(xì)胞形態(tài)異形性大，部分細(xì)胞由多角形變成類圓形，細(xì)胞密度約 40%（見(jiàn)圖 3E）；9Gy 組細(xì)胞形態(tài)基本消失，鏡下少見(jiàn)貼壁活細(xì)胞（見(jiàn)圖 3F）

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本文編號(hào)：2770272