【摘要】：目的:探討Twist1對人皮膚成纖維細胞復制性衰老的影響及其可能機制。方法:1、組織塊貼壁法提取人皮膚成纖維細胞(Human skin fibroblasts,HSF),通過連續(xù)傳代建立5個HSF的復制性衰老模型。將傳代的HSF分為年輕組(P3-7)、衰老組(P20-25),通過β-半乳糖核苷酶染色法比較細胞衰老染色率、5-乙炔基-2,脫氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2,deoxyuridine,Ed U)檢測細胞增殖率的變化以及蛋白免疫印跡(Western-Blot)檢測衰老相關蛋白p21表達的差異來驗證復制性衰老模型是否成功建立。2、通過Western-Blot檢測Twist1分別在年輕組與衰老組的表達情況。3、在年輕組中,通過分別轉染Si-Twist1(Si-Twist1組)及其陰性序列(NC組),Western-Blot檢測Twist1在Si-Twist1組中是否表達下調(diào)。并檢測β-半乳糖核苷酶染色率、細胞增殖率及p21蛋白在Si-Twist1組與NC組之間的表達差異。結果:1、相比于年輕組,衰老組HSF的β-半乳糖衰老染色率明顯增加,細胞增殖率明顯下降,衰老相關蛋白p21的表達明顯增加,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。這表明已成功建立了HSF的復制性衰老模型。2、Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)Twist1蛋白在年輕組HSF中的表達水平顯著高于衰老組(P0.05)。3、相比于NC組,Si-Twist1組的β-半乳糖核苷酶染色率升高、細胞增殖率下降及p21蛋白的表達升高(P0.05)。結論:Twist1在HSF的衰老過程中起重要作用,Twist1在衰老組HSF中表達明顯下調(diào)。在體外抑制Twist1的表達可引起HSF的復制性衰老,這為探討Twist1與HSF衰老的相關研究提供了依據(jù)。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R339.38
【圖文】：

3.1 建立人皮膚成纖維細胞的復制性衰老模型通過連續(xù)傳代培養(yǎng)得到原代 HSF 的方式建立復制性衰老模型，組織塊貼壁法獲得原代 HSF（圖 1a），本實驗共構建了 5 個復制性衰老模型，年輕組（P3-7）HSF（圖 1b）呈長梭形，排列成束狀，胞體飽滿，衰老組(P20-25)的 HSF（圖 1c）體積明顯變大，胞體變平，細胞排列紊亂。結果顯示如下：圖 3-2 所示相比于年輕組，衰老組的細胞衰老染色率顯著升高[(0.15±0.01)vs(0.50±0.01），t=26.72，P<0.01]。圖 3-3 所示為通過 EdU 檢測傳代后細胞增殖率的變化，發(fā)現(xiàn)相比于年輕組，衰老組的細胞增殖率明顯下降[(0.36±0.01）vs(0.10±0.01)，t=17.83，P<0.01]。圖 3-4 所示為通過 Western-blot 檢測衰老相關蛋白 p21 的表達變化，發(fā)現(xiàn)衰老組的 p21 蛋白的表達較年輕組明顯增加[(1.04±0.25）vs(1.90±0.17)，t=2.82，P<0.05]。以上實驗結果表明，已成功建立了 HSF 的復制性衰老模型。

圖 3-2 年輕組與衰老組β-半乳糖核苷酶染色率的比較（a）年輕組的細胞衰老染色（x100）；（b）衰老組細胞衰老染色（x100）；（c）兩組間細胞衰老染色率的柱狀圖圖 3-3 年輕組與衰老組細胞增殖率的比較（x100）

圖 3-3 年輕組與衰老組細胞增殖率的比較（x100）圖 3-4 年輕組(P5)與衰老組(P25)中 p21 蛋白的表達變化3.2 Twist1 在衰老組 HSF 中顯著下調(diào)收集同一個體來源的年輕組與衰老組的HSF，提取蛋白后，通過Western- blot檢測 Twist1 在兩組的表達情況。檢測結果顯示，Twist1 蛋白在衰老組的 HSF 中

【參考文獻】

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1 郭云;朱淑萍;沈金翠;王愛玲;鄧蘭;;VISIA對強脈沖光聯(lián)合注射除皺治療面部皮膚老化的定量評價[J];中國美容醫(yī)學;2015年11期

2 師迎旭;杜華;鄭國光;;人胚胎肺成纖維細胞復制性衰老模型的建立[J];中國老年學雜志;2014年08期

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本文編號：2761072