發(fā)布時(shí)間：2020-06-27 09:14

【摘要】：目的:建立肥胖哮喘模型,觀察肥胖哮喘小鼠體內(nèi)IL-6表達(dá)水平并探討肥胖哮喘氣道粘液高分泌的機(jī)制。方法:將從北京維通利華購的60只3周齡的SPF級(jí)小鼠,預(yù)飼養(yǎng)1周,然后分成4組:正常對(duì)照組(A組),肥胖組(B組),哮喘組(C組),肥胖哮喘組(D組),稱量4組每個(gè)小鼠體重。肥胖模型組(B、D組)給予HD001(脂肪比45%)高脂飼料喂養(yǎng),對(duì)照組(A、C組)給予普通飼料(脂肪比10%)喂養(yǎng),4組小鼠自由飲水,每日測(cè)得小鼠體長及重量。按照經(jīng)典的哮喘模型建立方法,給予哮喘模型組(C、D組)腹腔及霧化吸入卵清蛋白,對(duì)照組(A、B組)相應(yīng)的給予生理鹽水。末次激發(fā)后,采集實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。用ELISE法分別測(cè)得每組小鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的表達(dá)水平。各組小鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù),觀察氣道炎細(xì)胞浸潤情況,肺組織經(jīng)HE、PAS染色后,觀察各組小鼠氣道炎癥及粘液分泌情況。免疫組織化學(xué)染色肺組織觀察氣道粘液分泌及粘蛋白MUC5AC的表達(dá)水平。RT-PCR測(cè)得肺組織IL-6、Munc18b及Muc5ac的mRNA水平。Western-blot法定性定量檢測(cè)各組STAT3、Mun18b、Muc5ac的表達(dá)水平。結(jié)果:8周末測(cè)的各組小鼠體重,肥胖模型組小鼠體重大于正常組的20%。哮喘模型組在激發(fā)的過程中出現(xiàn)呼吸急促,抓鼻亂竄煩躁不安,大小便頻繁等表現(xiàn)。對(duì)照組無異常行為改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)束,無死亡小鼠出現(xiàn)。BALF細(xì)胞計(jì)數(shù),肥胖哮喘組和哮喘組白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞顯著高于正常組和肥胖組,(P0.05),肥胖哮喘組高于哮喘組,(P0.05),肥胖組的白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)稍高于正常組,無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于正常組,(P0.05)。肺組織HE、PAS及免疫組化染色,哮喘模型組(C、D組)氣道完整性缺失,支氣管上皮細(xì)胞不同程度的脫落,粘膜水腫,管壁增厚,周圍炎性細(xì)胞浸潤,粘液分泌增多。其中肥胖哮喘組行為表現(xiàn)更為明顯,肥胖組出現(xiàn)程度很輕的改變,正常組行為表現(xiàn)基本無任何改變。ELISA法測(cè)的血清和BALF中IL-6水平以及肺組織IL-6mRNA表達(dá)水平各組表現(xiàn)一致,肥胖組和正常組相比稍微升高,無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,哮喘組高于肥胖和正常組,(P0.05),肥胖哮喘組顯著高于哮喘組,(P0.05)。RT-PCR測(cè)得哮喘組和肥胖哮喘組Munc18b及Muc5ac得mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常組和肥胖組,(P0.05),其中肥胖哮喘組表達(dá)水平高于哮喘組。Western-blot測(cè)得各組肺組織中的STAT3、Munc18b、Muc5ac的表達(dá)水平,肥胖哮喘較其余三組均高,哮喘組、肥胖組、正常組依次遞減,(P0.05)。結(jié)論:成功建立肥胖哮喘模型;肥胖哮喘組小鼠氣道上皮及粘液細(xì)胞粘液分泌增多;IL-6通過STAT3-Munc18b信號(hào)通路,上調(diào)Muc5ac的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R562.25;R-332
【圖文】：

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于 A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P<0．05)，而 C 組與 D 組細(xì)胞計(jì)數(shù)相比有所降低，但仍是高于 B 組的中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，兩組差異有義(均 P<0.05)。B 白細(xì)胞總數(shù)和各類細(xì)胞計(jì)數(shù)均比 A 組有略微差距，提示肥是一種不明顯的炎性狀態(tài)。如表 8，圖 1，2 所示。表 8 各組小鼠 BALF 細(xì)胞總數(shù)及分類炎細(xì)胞所占比例（×104/ml，x ± s）組別白細(xì)胞總數(shù) 細(xì)胞分類計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 單核細(xì)胞A 組 7.70±1.12 2.90±0.23 4.30±0.32 17.50±2.02 70.40±4.36B 組 9.40±1.03a3.58±1.78a7.90±0.49a16.83±1.78a72.35±3.63aC 組D 組22.83±1.63ab26.68±0.87abc18.50±4.13ab23.81±4.37abc15.38±0.39ab23.03±0.78abc22.67±2.13ab24.13±1.56abc45.93±4.25ab40.70±5.99abc：a 與 A 組比較，P<0.05,b 與 B 組比較，P<0.05,C 與 c 組比較，P<0.05

各組小鼠血清中IL-6表達(dá)水平比較

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本文編號(hào)：2731634