【摘要】：研究背景:肌腱病是一種臨床常見疾病,主要患病人群是運動員及平時運動少的中年人。目前的一些體外研究表明,不同的制備方式制成的PRP(Platelet-Rich Plasma,富血小板血漿)制品中存在細胞成分的差異:如白細胞,血小板以及纖維蛋白原,尤其是白細胞含量的差異,可能就是PRP對肌腱病臨床療效不確切的主要原因之一。但是目前尚沒有關于在體內肌腱病環(huán)境下PRP中白細胞的影響的相關研究。PRP對肌腱病治療中,白細胞成分發(fā)揮影響的具體機制也尚不明確。研究方法:兔跟腱局部注射膠原酶4周建立肌腱病動物模型后被隨機分成3組,分別用(1)200 μLLp-PRP(Leukocyte-Poor PRP,去白細胞的富血小板血漿)(n=8),(2)200 μL Lr-PRP(Leukocyte-Rich PRP,富白細胞的富血小板血漿)(n = 8),以及(3)200 μL 生理鹽水(n = 8)對損傷跟腱局部進行注射治療。治療完成4周后,采集治療的跟腱組織,通過MRI掃描,HE及Masson染色,組織學評估,TEM(TransmissionElectron Microscopy,透射電子顯微鏡)掃描等方法對治療結果進行評估,采用統(tǒng)計學方法分析Lp-PRP組,Lr-PRP組和對照組之間治療結果的差異。并使用Elisa對肌腱組織中IL-1β,TNF-α及IL-6細胞因子進行定量分析,使用RT-PCR測定肌腱組織中MMP-1,3,9及TIMP基因表達水平來初步探究白細胞在PRP治療肌腱病過程中發(fā)揮影響時與細胞因子及相關基因表達的聯系。研究結果:跟腱組織MRI掃描結果顯示在T2加權圖像上,Lr-PRP組和對照組的平均信號強度顯著高于Lp-PRP組。HE及Masson染色的組織學結果顯示Lp-PRP組的炎癥評分,細胞密度評分及總評分均顯著優(yōu)于Lr-PRP組(P=0.001)和對照組(P0.001)。TEM掃描結果顯示Lp-PRP組的膠原纖維直徑相比于Lr-PRP組更大(P0.001),Lp-PRP組的膠原纖維密度顯著低于Lr-PRP組(P0.001)。Elisa實驗結果顯示Lp-PRP組的IL-6水平顯著低于Lr-PRP組(P=0.001)和對照組(P=0.21)。RT-PCR結果顯示Lp-PRP組Ⅰ型膠原基因的表達量顯著高于對照組(P=0.004),但與Lr-PRP組無顯著差異。Lp-PRP組和Lr-PRP組的MMP-1和MMP-3基因的表達量均顯著低于對照組,但只有Lp-PRP組的TIMP-1基因表達量顯著低于對照組(P=0.024)。研究結論:相比于Lr-PRP,Lp-PRP更能促進肌腱病中肌腱的修復,是臨床治療肌腱病的更優(yōu)選擇。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R686.1;R-332
【圖文】：

圖１．邋Ｌｐ－ＰＲＰ及Ｌｒ－ＰＲＰ制備流程示意圖逡逑１．２．２．２實驗流程設計及肌腱病動物模型制作逡逑１．分組。本實驗共使用３１只體重在２．５－３千克之間的新西蘭大白兔，其中隨機取逡逑４只兔子作為正常組，不做任何處理，其余２７只兔子將進行造摸處理。逡逑２．造摸。使用５ｍｌ注射器將２ｍｌ／ｋｇ的１０％水合氯醛緩慢注射入兔耳緣靜脈內進逡逑行靜脈麻醉，麻醉完成后使用剃毛器將兔子左側足跟附近兔毛剃凈，并使用５％聚逡逑維酮碘溶液對預注射部位附近進行消毒。注射時使用２９ｇ針頭在跟骨上方５＿處逡逑進針，針頭刺入跟腱后再沿著跟腱長軸緩慢進針約１0＿。然后一邊將針頭緩慢從逡逑跟腱中退出，一邊將Ｉ型膠原酶注入跟腱中，每只兔子注射３００ＵＩ膠原酶［４１］。注逡逑射膠原酶４周后，造模即完成。此時從２７只兔子中隨機選取３只兔子，于耳緣靜逡逑脈注射２０ｍｌ空氣進行安樂死后，采集左側跟腱組織進行ＨＥ染色，以驗證造模是逡逑否成功。逡逑

浙江大學博士學位論文邐第一部分逡逑式在左側跟腱中注射（１）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｐ－ＰＲＰ，邋（２）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｒ－ＰＲＰ，（３）邋０．２ｍＬ逡逑的生理鹽水［４１］。ＰＲＰ治療４周后，實驗兔子將被安樂死并取出左側跟腱組織進行逡逑后續(xù)實驗。逡逑

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