【摘要】：第一部分沙利度胺對系統(tǒng)性硬化病模型小鼠炎癥及纖維化病理改變的影響目的:研究沙利度胺(Thal)對系統(tǒng)性硬化病(SSc)模型小鼠皮膚及肺組織炎癥和纖維化等病理改變的影響。方法:將80只雌性BALB/c小鼠隨機分為14天組和28天組(n=40),采用博來霉素(BLM)皮下注射方法誘導SSc小鼠模型,分別以10、20、30mg/kg/d劑量的Thal灌胃治療,各組小鼠在灌胃第14、28天進行取材檢測。HE和Masson’s染色觀察小鼠背部注射部位皮膚、肺炎癥和纖維化評分,并測定羥脯氨酸(HYP)的含量;Rt-PCR法及免疫組化法檢測皮膚、肺組織I型膠原的表達情況。結果:(1)14天組和28天組Thal均能不同程度降低SSc小鼠模型皮膚、肺組織的炎癥評分,其中14天組皮膚F值=23.867,P0.05、肺組織F值=47.811,P0.05,28天組皮膚F值=34.412,P0.05、肺組織F值=45.953,P0.05;(2)14天組和28天組Thal均能不同程度降低SSc小鼠模型皮膚、肺組織的纖維化程度,其中14天組皮膚F值=37.698,P0.05、肺組織F值=65.500,28天組皮膚F值=72.906,P0.05、肺組織F值=35.498,P0.5;(3)14天組和28天組Thal均能不同程度降低SSc小鼠模型皮膚、肺組織的羥脯氨酸含量,其中14天組皮膚F值=5.834,肺組織F值=3.986,P0.05P0.05,28天組皮膚F值=3.631,P=0.045,肺組織F值=6.631,P=0.007;(4)14天組和28天組組間比較發(fā)現(xiàn)皮膚厚度、炎癥評分在10mg/Kg/d Thal灌胃治療時有統(tǒng)計學意義(P=0.039),而肺纖維化程度、炎癥評分差異僅在30mg/Kg/d Thal灌胃治療時有統(tǒng)計學意義(P=0.022);(5)28天組Thal能夠以劑量依賴性的方式降低肺組織I型膠原m RN A的表達,而Thal 20、30(mg/kg/d)治療時能夠降低皮膚I型膠原m RN A表達(P0.01);(6)28天組Thal能夠以劑量依賴性的方式降低皮膚和肺組織I型膠原蛋白的表達,但在Thal20、30(mg/kg/d)治療劑量下下調作用更強(P0.05)。結論:Thal治療能夠有效減輕SSc小鼠模型皮膚和肺組織炎癥、纖維化病變,并能夠降低皮膚和肺組織中羥脯氨酸的含量,抑制皮膚和肺組織I型膠原的表達。因此,我們推測Thal可能是治療SSc患者的一種經(jīng)濟、安全有效的藥物。第二部分沙利度胺對系統(tǒng)性硬化病模型小鼠CD4+Th細胞以及TGF-β1/Smad3通路的影響目的:觀察不同劑量沙利度胺(Thal)治療前后對系統(tǒng)性硬化病(SSc)小鼠模型Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞、Treg細胞以及相關因子水平和TGF-β1/Smad3通路的影響。方法:將80只雌性BALB/c小鼠隨機分為14天組和28天組(n=40),采用博來霉素(BLM)皮下注射方法誘導SSc小鼠模型,分別以10、20、30mg/kg/d劑量的Thal灌胃治療,各組小鼠在灌胃第14、28天進行取材檢測。流式細胞術檢測小鼠脾組織CD4+IL-4+(Th1)細胞、CD4+IFN-γ+(Th2)細胞、CD4+IL-17+(Th17)細胞以及CD4+CD25+Foxp3+(Treg)細胞的比例;RT-PCR、免疫組化、酶聯(lián)免疫吸附試驗等方法檢測外周血、皮膚、肺組織中白介素(IL-)17A、轉化生長因子(TGF)-β1、叉頭狀轉錄因子(Foxp3)、磷酸化細胞信號轉導因子3(p-Smad3)表達情況,進而評估SSc模型小鼠炎癥、纖維化病變的發(fā)生機制;蛋白免疫印跡方法檢測TGF-β1/Smad3信號通路蛋白表達及磷酸化水平,并分析與Th17、Treg及其相關細胞因子的相關性。結果:(1)14天組和28天組中Thal均能下調脾臟Th17細胞,上調Treg細胞(均P0.05),其中28天組中Thal 30(mg/kg/d)劑量治療下能夠將Th17細胞比例降低到NC組水平;(2)14天組和28天組中Thal均能以劑量依賴性的方式下調皮膚和肺組織細胞因子IL-17Am RNA的表達(均P0.05),上調轉錄因子Foxp3m RNA的表達(均P0.05);(3)14天和28天組組間對比發(fā)現(xiàn)皮膚、肺Foxp3 m RNA表達量、皮膚IL-17A m RNA表達量在30mg/Kg/d Thal灌胃治療時有統(tǒng)計學意義(P=0.035,P=0.009,P=0.022),而肺IL-17A m RNA表達量在20mg/Kg/d Thal灌胃治療時有統(tǒng)計學意義(P=0.005);(4)Thal以劑量依賴性的方式上調CD4+IL-4+(Th1)細胞以及細胞因子IFN-γm RNA細胞的表達(均P0.05),下調CD4+IFN-γ(Th2)細胞的表達(P0.05);(5)Thal以劑量依賴性的方式降低皮膚和肺組織IL-23R m RNA和RORgt m RNA的表達,相關性分析發(fā)現(xiàn)皮膚中IL-23R m RNA和RORgt m RNA以及肺RORgt m RNA水平與Th17呈正相關(r=0.9502,0.5664和0.7564,P0.05);(6)Thal能夠抑制TGF-β1/Smad3通路中TGF-β1、p-Smad3蛋白及TGF-β1 m RNA、p-Smad3 m RNA的表達(均P0.05);(7)相關性分析表明TGF-β1 m RNA與皮膚和肺組織IL-17A m RNA及IL-17A蛋白的表達呈正相關(r值分別為0.7280、0.6408,均P0.01),而與肺組織Foxp3 m RNA呈負相關(r=-0.3110,P=0.014);皮膚、肺組織以及血清中TGF-β1蛋白表達水平與IL-17A蛋白表達水平呈正相關(r值分別為0.8153、0.7187,均P0.01);血清中TGF-β1含量與脾臟中Th17/Treg呈正相關(r=0.6366,P=0.0107);結論:(1)Thal能夠下調Th17細胞比例及細胞因子IL-17A的表達,上調Treg細胞比例及其轉錄因子Foxp3的表達,降低Th17/Treg比值;(2)Thal處理可上調Foxp3的表達,促進其與RORgt的結合,從而抑制Th17細胞的增殖和功能;(3)Thal處理可以增加Th1細胞及細胞因子IFN-γ水平,但減少Th2細胞水平;(4)Thal治療可以抑制TGF-β1/Smad3信號通路的激活,從而預防纖維化病變。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R593.2;R-332
【圖文】：

.4Thal 對 BLM 誘導的 SSc 模型小鼠皮膚、肺組織 I 型膠原蛋白含量的影響通過采用免疫組化法對 28 天組皮膚和肺組織 I 型膠原蛋白表達情況進分析，研究結果顯示 Thal 能夠以劑量依賴性的方式下調皮膚和肺組織 I膠原的表達，但在 20、30（mg/kg/d）Thal 劑量下下調作用更強（圖 2-4， P＜0.05）NC BLM BLM+Thal(10) BLM+Thal(20) BLM+Thal(30)ANC BLM BLM+Thal(10) BLM+Thal(20) BLM+Thal(30)

9屆碩士研究生學位論文 沙利度胺對系統(tǒng)性硬化病模型小鼠炎癥及纖維化病變 染色(原始放大倍數(shù)*200)；B ：Masson 染色(原始放大倍數(shù)*200)。igure 3-1 Effect of Thal on pathological manifestations of the skin and lung in a mouse model of the end of the treatment, the skin and lung tissues were taken for HE & Masson staining.HE staining (original magnification × 200); B: Masson staining (original magnification × 200)。

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本文編號：2727509