【摘要】：目的:通過RNA干擾技術,研究線粒體核糖體大亞基蛋白35(MRPL35)和Ras蛋白特異性的鳥苷酸釋放因子2(RasGRF2)基因?qū)Y直腸癌裸鼠移植瘤模型在腫瘤生長和腫瘤轉(zhuǎn)移方面的影響。方法:構建沉默MRPL35基因慢病毒顆粒,感染HCT116大腸癌細胞,篩選穩(wěn)定敲低MRPL35的細胞克隆。將處于對數(shù)生長期的細胞接種于BALB/c裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型。觀察腫瘤生長情況、繪制腫瘤生長曲線;Real-Time PCR檢測皮下移植瘤中MRPL35 mRNA的表達水平,免疫組化檢測Ki-67和Cleaved caspase-3在腫瘤組織的表達;t-test分析移植瘤體積的差別。構建沉默RasGRF2基因慢病毒顆粒,感染HCT116大腸癌細胞,篩選穩(wěn)定敲低RasGRF2的細胞克隆。將處于對數(shù)生長期的細胞經(jīng)尾靜脈注射入BALB/c裸鼠,建立肺轉(zhuǎn)移腫瘤模型。觀察各組裸鼠的呼吸、體重、活動、精神等身體狀態(tài);取裸鼠肺組織,解剖顯微鏡下觀察裸鼠肺轉(zhuǎn)移情況,并計數(shù)轉(zhuǎn)移瘤結節(jié);IHC法檢測肺轉(zhuǎn)移瘤的RasGRF2、MMP9的表達情況;Kaplan-Meier法分析敲低RasGRF2與裸鼠生存率的關系。結果:成功構建了結直腸癌皮下移植瘤模型,在成瘤后3周內(nèi),實驗組與對照組相比,腫瘤體積較小,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05);Real-Time PCR結果顯示實驗組腫瘤較對照組MRPL35表達減少(P0.05);Ki-67、Cleaved caspase-3的免疫組化結果顯示,與對照組相比,敲減MRPL35基因后,Ki-67表達減少72%、Cleaved caspase-3表達增加61%。經(jīng)尾靜脈肺轉(zhuǎn)移模型中,建模8周后,觀察裸鼠出現(xiàn)明顯消瘦、弓背、精神萎靡等現(xiàn)象。實驗組裸鼠肺轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目少于對照組,差別有統(tǒng)計學意義(P0.05);免疫組化染色發(fā)現(xiàn)實驗組腫瘤組織中表達RasGRF2、MMP9較對照組少;Kaplan-Meier生存分析顯示敲減RasGRF2裸鼠生存率明顯高于對照組(P0.05)。結論:在動物水平敲減MRPL35可以抑制結直腸癌的增殖;在動物水平敲減RasGRF2基因可以抑制結直腸癌的轉(zhuǎn)移。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R-332;R735.34

【參考文獻】

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1 Renato Costi;Francesco Leonardi;Daniele Zanoni;Vincenzo Violi;Luigi Roncoroni;;palliative care and end-stage colorectal cancer management:The surgeon meets the oncologist[J];World Journal of Gastroenterology;2014年24期

2 李祖國;趙亮;劉莉;丁彥青;;結直腸癌轉(zhuǎn)移動物模型血清中幾種蛋白變化的觀察[J];中華病理學雜志;2007年01期

本文編號：2714764