【摘要】：背景帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種以黑質(zhì)(substantia nigra,SN)多巴胺能神經(jīng)元的大量丟失為主要病理特征的中樞神經(jīng)退行性疾病。臨床上的PD患者常出現(xiàn)靜止性震顫和慌張步態(tài)等軀體運動障礙。此外,PD患者所表現(xiàn)出的如睡眠障礙、代謝異常、嗅覺障礙、消化不良和體位性低血壓等的非運動癥狀被逐漸重視。相關(guān)研究表明,帕金森病人在早期就會出現(xiàn)糖代謝紊亂的癥狀。下丘腦室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)能分泌多種激素,對于維持體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)起到至關(guān)重要的作用。并且,下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis,HPA軸)最初的應答驅(qū)動點開始于PVN,它是促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)神經(jīng)元的主要合成部位,CRH通過作用于腺垂體促使促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)釋放到正中隆起的垂體門靜脈血管中,ACTH又可從垂體釋放并通過全身循環(huán)傳播到腎上腺皮質(zhì),在腎上腺皮質(zhì)中促進糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)的合成和分泌,參與機體血糖調(diào)節(jié)。糖皮質(zhì)激素在動物體內(nèi)主要以皮質(zhì)酮(corticosterone,CORT)的形式存在。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),SN到PVN內(nèi)有多巴胺能神經(jīng)纖維的投射。但患有PD時中樞多巴胺能纖維的改變是否會導致HPA軸通路異常的相關(guān)報道相對較少。我們推測PD時,SN投射到PVN的多巴胺纖維減少,可能導致HPA軸通路異常以致最終引發(fā)全身血糖調(diào)節(jié)的紊亂。目的以6-羥多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)大鼠為研究模型,觀察其糖耐量、HPA軸上ACTH和CORT的含量變化,并證實PVN內(nèi)多巴胺受體1和2(dopamine receptor 1 and 2,D_1/D_2)表達的改變,以及D_2與CRH的共表達,為PD病人發(fā)生糖代謝紊亂的可能機制提供形態(tài)學依據(jù)。方法1.使用腦立體定位儀將6-OHDA注射入大鼠雙側(cè)SN,破壞SN內(nèi)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表達。2.運用腹腔內(nèi)注射葡萄糖耐量實驗比較Control組和6-OHDA模型組大鼠的血糖變化。3.利用尼氏染色技術(shù)對腦內(nèi)核團SN和PVN進行定位。4.使用免疫組化二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine,DAB)顯色技術(shù)檢測大鼠SN內(nèi)TH的破壞情況。5.使用免疫熒光技術(shù)檢測PVN各亞細胞部上D_1和D_2的表達。6.利用免疫熒光雙標觀察PVN內(nèi)D_1與加壓素(vasopressin,VP)、D_1與催產(chǎn)素(oxytocin,OT)、D_2與VP、D2與OT、TH與D_1、TH與D_2和D_2與CRH的共表達。7.使用免疫印跡法(western blot,WB)檢測下丘腦內(nèi)的TH、D_1、D_2和CRH的蛋白含量。8.運用放射性免疫實驗方法檢測血液和組織中ACTH以及CORT的含量。結(jié)果1.尼氏染色結(jié)果顯示經(jīng)6-OHDA處理的大鼠SN部位的神經(jīng)元數(shù)目顯著減少,尼氏體模糊,顆粒及密度均降低;SN的TH免疫陽性神經(jīng)元的數(shù)目顯著減少。2.6-OHDA模型組大鼠經(jīng)腹腔注射葡萄糖后,15 min和30 min時血糖明顯高于Control組,表明其糖耐量降低。3.與Control組相比,6-OHDA組大鼠垂體組織中的ACTH和血液中的CORT都有升高的趨勢,表明6-OHDA組大鼠HPA軸被活化。4.在Control組大鼠PVN的各個細胞分部上都有D_1和D_2的表達,而且在大細胞部外側(cè)大細胞部(paraventricular hypothalamic nucleus,lateral magnocellular part,PaLM)上,D_1與VP和OT都有共表達,D_2與VP和OT同樣也都有共表達。5.在PVN上,有大量的TH纖維圍繞在D_1或D_2周圍。在Control組上,PaLM大多數(shù)TH陽性神經(jīng)元同時表達D_1或D_2,CRH與D_2的共表達也大量存在。而6-OHDA模型組大鼠上,D_2和TH神經(jīng)元表達明顯減少,CRH表達增多,D_1無明顯變化。結(jié)論D_1和D_2廣泛表達在PVN,不僅分布在VP和OT神經(jīng)元上,還大量分布在CRH神經(jīng)元上。損傷SN可以引起大鼠糖耐量下降、PVN上D_2表達減少、CRH免疫陽性神經(jīng)元增多、以及垂體內(nèi)組織內(nèi)的ACTH、血液中CORT的含量升高。提示:黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元可能通過SN-PVN投射在D_2的介導下調(diào)節(jié)CRH神經(jīng)元功能。該研究為多巴胺通過介導PVN上CRH能神經(jīng)元調(diào)節(jié)機體糖代謝提供了形態(tài)學依據(jù)。
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R742.5;R-332
【圖文】：

圖 1：6-OHDA 模型組大鼠 SN 上的 TH 免疫陽性和蛋白表達。黑色虛線框內(nèi)是 SN 所在部位，棕色代表 TH 陽性表達。A. Control 組（左）與 6-OHDA 模型組（右），Scale bar: 100 μm。B. WB 結(jié)果顯示 Control 組和 6-OHDA 模型組大鼠 SN 內(nèi) TH 的蛋白表達。以 GAPDH 作為內(nèi)參。C. 直方圖顯示，與 Control 相比，6-OHDA 模型組大鼠 SN 中 TH 蛋白表達明顯下降。SN: substantia nigra，黑質(zhì)；THtyrosine hydroxylase，酪氨酸羥化酶（***P＜0.001）Figure 1: TH immuno-positive and protein expression on SN in rats of 6-OHDA model group. SN ilocated in the dotted black box, and brown represents the positive expression of TH. A. Control group (leftand 6-OHDA model group (right), Scale bar: 100 μm. B. Western blot results showed the protein expressionof TH in SN in rats at the control group and the 6-OHDA model group. GAPDH was used as the internareference. C. Histogram showed that, compared with the control group, the expression of TH protein in SN inthe 6-OHDA model group was significantly decreased. SN: substantia nigra; TH: tyrosine hydroxylase (***P＜0.01)1.2 血糖鑒定

和 6-OHDA 模型組大鼠腹腔葡萄糖耐量檢測。從圖中可以看出，腔注射葡萄糖后，與 Control 組相比，6-OHDA 組血糖在 15 min 6-OHDA 模型組大鼠糖耐量出現(xiàn)降低了的癥狀。IPGTT：腹腔e tolerance in 2 h of rats in the control group and the 6-ohda mode there was no difference in fasting blood glucose between the twon of glucose, compared with the control group, the blood glucosy higher at 15 min and 30 min than that of the control group, indicatiHDA model group was reduced. IPGTT: glucose tolerance test 學觀察的方法對 PVN 的各個細胞分部進行定位。通過冠狀切

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號：2713406