【摘要】：研究目的:1.針對(duì)不同來(lái)源沙門氏菌中β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥表型性狀和耐藥基因(blaTEM、blaCTX-M、baaOXA、blaCMX、blaPSE和blaSHV)攜帶狀況,分析不同來(lái)源沙門氏菌中β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥相關(guān)性,為控制沙門氏菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性的產(chǎn)生與傳播,以及為臨床和家禽畜牧養(yǎng)殖業(yè)指導(dǎo)沙門氏菌病的治療提供參考依據(jù)。2.研究頭孢噻肟酶(CTX-M)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶家族在本地區(qū)的分布及流行狀況,利用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)攜帶CTX-M不同基因型的菌株進(jìn)行分子溯源,分析CTX-M不同基因型與PFGE分子型別間的關(guān)系。研究不同CTX-M基因型之間的地區(qū)差異性以及本地區(qū)CTX-M基因型的同源性和流行病學(xué)特征。3.利用全基因測(cè)序方法對(duì)部分?jǐn)y帶CTX-M基因型的菌株進(jìn)行測(cè)序,分析CTX-M不同基因型間的氨基酸變異狀況及其上下游含有的可移動(dòng)遺傳序列,從而尋找CTX-M基因型變異的原因和傳播機(jī)制,為有效遏制CTX-M基因型的流行提供參考依據(jù)。研究方法:1.參照GB4789.4-2010,鑒定271株不同來(lái)源沙門氏菌血清型;利用紙片擴(kuò)散法對(duì)7種β-內(nèi)酰胺類抗生素進(jìn)行藥敏試驗(yàn);利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)6種β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥基因。2.利用PCR方法對(duì)61株攜帶CTX-M基因型的沙門氏菌進(jìn)行分型;利用沙門氏菌PFGE分子分型方法,選用XbaI對(duì)沙門氏菌基因組進(jìn)行酶切,從而對(duì)攜帶CTX-M不同基因型菌株進(jìn)行分子分型。3.利用TAKARA DNA提取試劑盒提取12株攜帶CTX-M基因的沙門氏菌DNA進(jìn)行全基因組測(cè)序,將所得耐藥基因利用The Comprehensive Antibiotic Resistance Database(CARD)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行注釋;選取國(guó)際上已發(fā)表的CTX-M-1、CTX-M-9和CTX-M-64基因型為標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過(guò)核酸BLAST比對(duì)尋找CTX-M氨基酸易突變位點(diǎn)。研究結(jié)果:1.271株沙門氏菌主要血清型為腸炎沙門氏菌、印第安納沙門氏菌、德?tīng)柋吧抽T氏菌和鼠傷寒沙門氏菌。人源菌株以腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌為主,動(dòng)物源菌株以腸炎沙門氏菌和印第安納沙門氏菌為主。7種β-內(nèi)酰胺類抗生素中,人源菌株對(duì)氨芐西林耐藥率最高(43.16%),其次為頭孢哌酮(18.95%)和阿莫西林(9.47%);動(dòng)物源菌株對(duì)氨芐西林耐藥率最高(69.32%),其次為頭孢哌酮(57.39%)和頭孢噻肟(33.52%)。人源與動(dòng)物源菌株之間的耐藥性Pearson相關(guān)性系數(shù)為0.821。耐藥表型中,耐5種抗生素所占比例為36.99%,耐6種抗生素,所占比例27.4%。人源菌株blaTEM攜帶率為37.89%,blaoxA攜帶率為5.26%;動(dòng)物源菌株blaTEM攜帶率為60.23%,blaCTX-M攜帶率為32.39%。2.61株攜帶CTX-M基因型的菌株分為3個(gè)群6種基因型,CTX-M-1群為CTX-M-55和 CTX-M-79;CTX-M-9 群主為 CTX-M-65、CTX-M-14 和 CTX-M-27;CTX-M-64 群為CTX-M-123。印第安納沙門氏菌、湯卜遜沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌主要型別為CTX-M-65,腸炎沙門氏菌主要型別為CTX-M-55。PFGE分子分型分為4個(gè)群(A1-A2群、B1-B6群、C群和D1-D2群)。A群和B群菌株來(lái)源地區(qū)各不相同,CTX-M型別主要為CTX-M-55;C群菌株來(lái)源地區(qū)相同,CTX-M型別主要為CTX-M-65;D群菌株來(lái)源地區(qū)不同,CTX-M型別主要為CTX-M-65。3.根據(jù)全基因測(cè)序,CTX-M-1群和CTX-M-9群易突變的氨基酸位點(diǎn)均有4個(gè),CTX-M-1群為第1位、第117位、第143位和第289位,CTX-M-9群為第80位、第234位、第242位和第289位。12株測(cè)序菌株CTX-M基因型上下游具有插入序列(IS),CTX-M-65 型和 CTX-M-27 型上游為 ISEcp1,下游為 IS903;CTX-M-55 型上游為 ISEcp1,下游無(wú)插入序列;CTX-M-14型上游無(wú)插入序列,下游為IS903。研究結(jié)論:1.本研究中沙門氏菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥狀況較嚴(yán)重,動(dòng)物源沙門氏菌尤甚。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析表明動(dòng)物源沙門氏菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥狀況會(huì)影響人源沙門氏菌對(duì)其耐藥性。動(dòng)物源沙門氏菌攜帶大量的耐藥基因,比人源菌株攜帶率高2倍左右,對(duì)人類有巨大的潛在危害。2.CTX-M型別多樣,是目前流行最廣泛的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。本地區(qū)的主要基因型為CTX-M-55和CTX-M-65。禽源印第安納沙門氏菌攜帶多種CTX-M型,是本地區(qū)CTX-M基因型的主要來(lái)源。PFGE分子溯源表明,沙門氏菌血清型、PFGE分子分型、來(lái)源和地區(qū)的不同,CTX-M基因型的分布也不相同,CTX-M基因型與沙門氏菌血清型、PFGE分子分型、來(lái)源和地區(qū)有著密切的關(guān)系。3.CTX-M基因型的多變性,導(dǎo)致其氨基酸位點(diǎn)的易突變性。相同群的CTX-M基因型具有固定的突變位點(diǎn),這些位點(diǎn)的氨基酸發(fā)生改變,CTX-M型別也會(huì)隨之改變,但CTX-M群與群之間氨基酸位點(diǎn)差別較大,沒(méi)有表現(xiàn)出固定的突變位點(diǎn)。CTX-M上下游具有插入序列ISEcp1和IS903,這兩種插入序列在CTX-M上下游最常見(jiàn),是CTX-M基因型在沙門氏菌之間、沙門氏菌與其它腸桿菌之間傳播的主要移動(dòng)原件,能加速CTX-M基因型的傳播與變異。CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的易突變性和易傳播性是沙門氏菌產(chǎn)生多重耐藥甚至廣泛耐藥的主要原因之一。
【圖文】：

根據(jù)沙門氏菌的來(lái)源，人源與動(dòng)物源沙門氏菌耐藥狀況經(jīng)相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Ｐｅａｒｓｏｎ逡逑相關(guān)性系數(shù)為０．８２１，邋Ｐ＝０．０２３＜０．０５，人源與動(dòng)物源沙門氏菌耐藥之間存在線性相關(guān)關(guān)系（見(jiàn)逡逑圖１）。逡逑５０逡逑？邋ＡＭＰ逡逑人４０逡逑源逡逑沙逡逑ｎ３０逡逑ｉＵ邋２０邐＃逡逑＾邐ＣＦＰ逡逑％邐ＡＭＣ逡逑ｗ邋１0邐ＣＴＸ－Ｍ逡逑？Ｆ０Ｘ邋？？逡逑ｆＥＰ邋？邐ＣＲＯ逡逑０邋邐Ｚ邐—邐邐，邐，邐邐逡逑０邐１０邐２０邐３０邐４０邐５０邐６０邐７０邐８０逡逑動(dòng)物源沙ｎ氏菌（％）逡逑圖１－１不同來(lái)源沙門氏菌耐藥相關(guān)性逡逑３．３沙門氏菌ｐ－內(nèi)酰胺類耐藥譜逡逑２７１株沙門氏菌在７種抗生素耐藥表型中共產(chǎn)生２５種耐藥譜，在耐三種以上的抗生素逡逑中，耐５種抗生素所占比例最多，為３６．９９％（２７／７３），其次為耐６種抗生素所占比例為２７．４％逡逑（２０／７３）。人源中耐３種及以上抗生素的耐藥譜相對(duì)于動(dòng)物源較少，尤其是耐５種和６種逡逑抗生素，人源中均只含有１株。在含有頭孢西丁的耐藥譜中，人源較多，而動(dòng)物源只含有逡逑

且來(lái)源地區(qū)相同。Ｃ群未有亞群，只含有ＣＴＸ－Ｍ－６５—種基因型，且來(lái)源地區(qū)逡逑相同。Ｄ群中，Ｄ１亞群只含有ＣＴＸ－Ｍ－１４—種基因型；Ｄ２亞群只含有ＣＴＸ－Ｍ－６５—種基逡逑因型，，且來(lái)源地區(qū)相同（見(jiàn)圖２－２）。逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R378.22

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本文編號(hào)：2707327