【摘要】：自2001年Steinman等人發(fā)現(xiàn)釀酒酵母可激活DCs并引發(fā)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的現(xiàn)象以來,研究者開始將目光集中到利用重組酵母進(jìn)行口服疫苗的開發(fā)。大量研究表明Ghrelin在機(jī)體食欲、體重和脂肪代謝等生理活動(dòng)的調(diào)解中發(fā)揮著重要作用,尤其在促進(jìn)機(jī)體進(jìn)食過程中發(fā)揮重要作用。研究表明,Ghrelin含量減少會(huì)降低食欲從而影響動(dòng)物體的體重,同時(shí)有研究表明機(jī)體內(nèi)的Ghrelin含量降低不會(huì)影響小鼠生長機(jī)能。因此近年來通過降低Ghrelin含量來降低動(dòng)物體重進(jìn)而達(dá)到減肥效果的思路逐漸受到廣泛關(guān)注。本研究以本團(tuán)隊(duì)開發(fā)的酵母免疫系統(tǒng)為基礎(chǔ),構(gòu)建了可應(yīng)用到該免疫系統(tǒng)的Ghrelin基因真核表達(dá)載體JMB84-CMV-Ghrelin和融合表達(dá)雞卵清白蛋白基因(OVA)的真核表達(dá)載體JMB84-CMV-OVA-Ghrelin,之后使用釀酒酵母JMY1成功構(gòu)建兩種口服免疫酵母。實(shí)驗(yàn)中,以空載體組和PBS組作為對(duì)照組,不同的口服重組酵母組作為實(shí)驗(yàn)組,分別命名為JMB84-CMV-Ghrelin組和JMB84-CMV-OVA-Ghrelin組,按實(shí)驗(yàn)室完善的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行口服飼喂實(shí)驗(yàn),56天后,JMB84-CMV-OVA-Ghrelin組的小鼠日均采食量最低,體重的相對(duì)生長最小,說明了該重組酵母發(fā)揮作用會(huì)降低機(jī)體內(nèi)Ghrelin的含量,進(jìn)而使小鼠食欲降低,能量消耗變多,體重降低。此外,我們還構(gòu)建了可用于原核表達(dá)的pET32a-Ghrelin載體,后續(xù)的研究我們將會(huì)以原核表達(dá)的Ghrelin蛋白為抗原,對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的抗體產(chǎn)生情況進(jìn)行檢測(cè)。綜上所述,本研究成功構(gòu)建了兩種Ghrelin基因的真核表達(dá)載體,并將該真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化進(jìn)入釀酒酵母成功構(gòu)建兩種口服重組免疫酵母,此外,我們還通過動(dòng)物活體實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種重組酵母的免疫效果進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)OVA-Ghrelin融合表達(dá)的免疫效果優(yōu)于Ghrelin單獨(dú)表達(dá)。本研究為治療病人肥胖病提供了一種新的思路,為后續(xù)該系統(tǒng)的進(jìn)一步深入研究奠定了良好的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392-33

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8 游s，

本文編號(hào)：2705458