【摘要】：人乳腺中存在多種經(jīng)蛋白酶特異性切割的內(nèi)源肽,這些內(nèi)源肽可以更好的滿足嬰兒較弱的胃腸道消化作用也可能具有活性。對(duì)不同人乳中內(nèi)源肽的組成分析是目前國內(nèi)外一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域,不僅有助于對(duì)嬰兒胃腸道消化能力的促進(jìn)和免疫系統(tǒng)的建立提供理論依據(jù),對(duì)更貼近人乳的嬰兒配方食品研發(fā)提供有益探索。本論文采用超濾法對(duì)人乳中的內(nèi)源肽進(jìn)行分離純化,建立了一種利用LC-MS/MS技術(shù)研究人乳內(nèi)源肽組成的方法,對(duì)不同泌乳期不同個(gè)體的人乳內(nèi)源肽組成特點(diǎn)進(jìn)行分析,從中篩選有潛在活性的抗菌肽。本論文的主要工作分為3部分,主要結(jié)論如下:(1)蛋白質(zhì)濃度及肽濃度。初乳的蛋白濃度為12.423 mg/mL 44.424mg/mL,內(nèi)源肽濃度為0.98mg/mL 5.40mg/mL;成熟乳的蛋白濃度為9.366mg/mL 22.254mg/mL,內(nèi)源肽濃度為0.52mg/mL 6.12mg/mL。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示內(nèi)源肽濃度和蛋白濃度兩個(gè)變量之間不存在相關(guān)性。所有數(shù)據(jù)顯示,蛋白濃度和內(nèi)源肽濃度在初乳中的表現(xiàn)均要高于成熟乳。(2)內(nèi)源肽肽譜組成�；旌蠘悠方�(jīng)LC-MS/MS鑒定的內(nèi)源肽數(shù)量為771-1691條,其釋放內(nèi)源肽的蛋白質(zhì)數(shù)目為24-55個(gè)。獨(dú)立樣品經(jīng)LC-MS/MS鑒定的內(nèi)源肽數(shù)量為380-2536條,其釋放內(nèi)源肽的蛋白質(zhì)數(shù)目為21-137個(gè)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示不同泌乳期肽段數(shù)之間沒有顯著差異,而母體蛋白數(shù)有顯著差異,初乳高于成熟乳。不同樣品中肽段數(shù)前十的蛋白有很高的相似性,大部分乳肽均來自β-酪蛋白(50%),其他主要蛋白質(zhì)前體包括免疫球蛋白受體、αs1-酪蛋白、骨橋蛋白及κ-酪蛋白等。完全混合的初乳和成熟乳樣品中有950條肽段重合,占總肽段數(shù)的40%,與MBPDB數(shù)據(jù)庫中的活性肽進(jìn)行比對(duì)共匹配到14條活性肽段,涉及免疫活性、抗氧化活性、ACE抑制活性、抗菌活性以及刺激細(xì)胞增殖活性。(3)高豐度肽段。不同樣品中強(qiáng)度前20的肽段匯總共有70條,涉及αs1-酪蛋白、乳鐵蛋白、免疫球蛋白受體、骨橋蛋白和β-酪蛋白5個(gè)母體蛋白,其中來源于β-酪蛋白的肽段共有66條且強(qiáng)度也最高,這些肽段主要集中在β-酪蛋白序列的180-226位氨基酸區(qū)間。(4)選擇大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為代表菌種驗(yàn)證篩選出的肽段是否具有廣譜抗菌能力。抑菌圈法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:經(jīng)篩選得到的6條肽段對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都有明顯的抑制效果。在加樣量為3.5mg時(shí),對(duì)兩種菌的抑菌圈直徑范圍分別為0.85-0.50cm和0.85-0.40cm。
【圖文】：

15圖 2-3 不同地區(qū)相同泌乳期鑒定到的肽段（a~b）及蛋白（c~d）維恩圖Fig.2-3 Venn diagram of the peptides（a~b）and proteins（c~d）identified in same lactation period地區(qū)初乳中共有內(nèi)源肽占其相應(yīng)樣品內(nèi)源肽的比例均超過 60%，其共有的母體蛋白占樣的比例均超過 50%，說明不同地區(qū)的母乳內(nèi)源肽及其母體蛋白具有非常高的共性。而對(duì)，共有肽在樣品中所占比例除了武漢達(dá)到了 53%，其他兩個(gè)地區(qū)均在 30%以下，武漢樣由于其所檢測(cè)的肽總數(shù)過低引起的，這個(gè)結(jié)果說明三個(gè)地區(qū)成熟乳的內(nèi)源肽的多樣性明顯

圖 2-2 各組初乳、成熟乳中鑒定到肽段（a~d）及蛋白（e~h）維恩圖Fig.2-2 Venn diagram of the peptides（a~d）and proteins（e~h）identified in each colostrum and mature milk group
【學(xué)位授予單位】：大連海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R339.23

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉微;王辰元;張婉舒;李萌;劉寧;;人乳β-酪蛋白單體二級(jí)結(jié)構(gòu)及膠束微觀結(jié)構(gòu)的研究[J];中國乳品工業(yè);2014年10期

2 陳啟;賴世云;張京順;任一平;;利用超高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜定量檢測(cè)人乳中的α-乳白蛋白[J];食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào);2014年07期

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本文編號(hào)：2705056