【摘要】：甲型流感病毒有引起嚴(yán)重流行病的歷史,包括1918年西班牙流感、1976年在美國發(fā)生的人類流感、1988年的人畜互傳流感、2009年流感大爆發(fā)及2015年的流感。病毒亞型的特性是突變成多種病原譜不同的菌株,最終在短時(shí)間內(nèi)獲得較高的適應(yīng)度,病毒表面糖蛋白、血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)是所有流感蛋白中進(jìn)化速度最快的。突變病毒中積累的氨基酸替換使病毒能夠逃避免疫系統(tǒng),這種氨基酸替換的積累過程可以導(dǎo)致表面糖蛋白的抗原改變,即抗原漂移或點(diǎn)突變。除了點(diǎn)突變外,基因重組在新出現(xiàn)病毒的進(jìn)化中也發(fā)揮著重要作用。本課題擬通過測(cè)序獲得2016年廣州市流感病毒的基因組信息,以了解廣州地區(qū)H1N1pdm病毒的變異情況和遺傳進(jìn)化情況,為廣州地區(qū)A型(H1N1)流感后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究以及流感大流行的防控提供數(shù)據(jù)支持。目的:分離2016年廣州市15株流感病毒,進(jìn)行基因測(cè)序分析其變異情況,進(jìn)行進(jìn)化分析和選擇壓力分析,為后續(xù)病毒研究、了解病毒耐藥性和致病性、尋找變異規(guī)律提供科學(xué)依據(jù)。方法:從患者咽拭子中提取病毒和RT-PCR方法對(duì)病毒進(jìn)行鑒定,應(yīng)用二代測(cè)序技術(shù)測(cè)定15個(gè)分離株的全基因組序列,通過MAGA6.0軟件與參考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))進(jìn)行比對(duì),分析氨基酸變異情況,并進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析和選擇壓力分析,以揭示2016年廣州H1N1pdm病毒的變化模式。結(jié)果:15個(gè)H1N1流感病毒分離株與參考株pdm2009(A/Califomia/07/2009(H1N1))進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn),8個(gè)蛋白片段的變異程度不高,HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)變異;NA蛋白在與耐藥性有關(guān)的氨基酸位點(diǎn)均未發(fā)現(xiàn)變異,表明對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制劑藥物敏感;未發(fā)現(xiàn)影響抗原性、病毒感染細(xì)胞能力和病毒基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄有關(guān)的變異。進(jìn)化樹分析表明:以HA基因?yàn)榘谢?本研究所分離的病毒株獨(dú)立于全球流行的H1N1pdm病毒的7個(gè)分枝。病毒進(jìn)化過程中,分別形成兩個(gè)譜系進(jìn)行,二者之間無重組現(xiàn)象;選擇壓力分析顯示H1N1pdm病毒主要表面蛋白中有6個(gè)陽性選擇位點(diǎn)。結(jié)論:2016年廣州市H1N1流感病毒引起的為輕癥感染;病毒抗原表位未發(fā)生變異,無新的耐藥病毒株出現(xiàn),未發(fā)現(xiàn)強(qiáng)致病力毒株;以HA基因?yàn)榘谢?本研究所分離的病毒株獨(dú)立于全球流行的H1N1pdm病毒的7個(gè)分枝。病毒進(jìn)化過程中,分別形成兩個(gè)譜系進(jìn)行,二者之間無重組現(xiàn)象;H1N1pdm病毒6個(gè)蛋白位點(diǎn)在病毒進(jìn)化過程中經(jīng)歷了陽性選擇。廣州流行的H1N1pdm病毒在不斷進(jìn)化,需要持續(xù)監(jiān)測(cè)H1N1pdm病毒,預(yù)防該病毒的流行。
【圖文】：

圖３－１部分病例擴(kuò)增結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ｃａｓｅｓ逡逑ａｒｋｅｒ；邋Ｌａｎｅ邋１－６，樣品編號(hào)邋１０１、１０７、１０８、１２６、１５６、看出，應(yīng)用一對(duì)引物可以對(duì)樣品的８?jìng)�(gè)節(jié)段進(jìn)行有效打下了基礎(chǔ)。逡逑基酸變異分析逡逑白的基因大小為１７４２－１７７８ｂｐ，邋ＨＡ蛋白由５６６個(gè)氨基個(gè)分離株出現(xiàn)了邋２３個(gè)氨基酸置換（表３－１）。本次試株與Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（ｍＮｌ）比對(duì)，，在受體結(jié)合位點(diǎn)

邐１逡逑０．０５逡逑圖３－２邋ＨＩＮＩ病毒ＨＡ序列進(jìn)化樹逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２邋ＨＡ邋ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ邋ｔｒｅｅ邋ｏｆ邋ＨＩＮＩ邋ｖｉｒｕｓ逡逑從圖中，我們可以看出：隨著流行時(shí)間的延長(zhǎng)，Ｈ１Ｎ１病毒株的遺傳距離增逡逑力口。我們所測(cè)的病例ＨＡ序列，與以往流行株之間遺傳距離增加至可以分為兩個(gè)逡逑分支，即邋Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ邋２０１６Ａ邋和邋Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ邋２０１６Ｂ，而邋Ｇ?
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R373.13

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本文編號(hào)：2703397