【摘要】：甲型流感病毒有引起嚴重流行病的歷史,包括1918年西班牙流感、1976年在美國發(fā)生的人類流感、1988年的人畜互傳流感、2009年流感大爆發(fā)及2015年的流感。病毒亞型的特性是突變成多種病原譜不同的菌株,最終在短時間內(nèi)獲得較高的適應度,病毒表面糖蛋白、血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)是所有流感蛋白中進化速度最快的。突變病毒中積累的氨基酸替換使病毒能夠逃避免疫系統(tǒng),這種氨基酸替換的積累過程可以導致表面糖蛋白的抗原改變,即抗原漂移或點突變。除了點突變外,基因重組在新出現(xiàn)病毒的進化中也發(fā)揮著重要作用。本課題擬通過測序獲得2016年廣州市流感病毒的基因組信息,以了解廣州地區(qū)H1N1pdm病毒的變異情況和遺傳進化情況,為廣州地區(qū)A型(H1N1)流感后續(xù)的實驗研究以及流感大流行的防控提供數(shù)據(jù)支持。目的:分離2016年廣州市15株流感病毒,進行基因測序分析其變異情況,進行進化分析和選擇壓力分析,為后續(xù)病毒研究、了解病毒耐藥性和致病性、尋找變異規(guī)律提供科學依據(jù)。方法:從患者咽拭子中提取病毒和RT-PCR方法對病毒進行鑒定,應用二代測序技術測定15個分離株的全基因組序列,通過MAGA6.0軟件與參考株pdm2009(A/California/07/2009(H1N1))進行比對,分析氨基酸變異情況,并進行系統(tǒng)發(fā)育分析和選擇壓力分析,以揭示2016年廣州H1N1pdm病毒的變化模式。結果:15個H1N1流感病毒分離株與參考株pdm2009(A/Califomia/07/2009(H1N1))進行比對發(fā)現(xiàn),8個蛋白片段的變異程度不高,HA蛋白受體結合位點未發(fā)現(xiàn)變異;NA蛋白在與耐藥性有關的氨基酸位點均未發(fā)現(xiàn)變異,表明對神經(jīng)氨酸酶抑制劑藥物敏感;未發(fā)現(xiàn)影響抗原性、病毒感染細胞能力和病毒基因組的復制和轉錄有關的變異。進化樹分析表明:以HA基因為靶基因,本研究所分離的病毒株獨立于全球流行的H1N1pdm病毒的7個分枝。病毒進化過程中,分別形成兩個譜系進行,二者之間無重組現(xiàn)象;選擇壓力分析顯示H1N1pdm病毒主要表面蛋白中有6個陽性選擇位點。結論:2016年廣州市H1N1流感病毒引起的為輕癥感染;病毒抗原表位未發(fā)生變異,無新的耐藥病毒株出現(xiàn),未發(fā)現(xiàn)強致病力毒株;以HA基因為靶基因,本研究所分離的病毒株獨立于全球流行的H1N1pdm病毒的7個分枝。病毒進化過程中,分別形成兩個譜系進行,二者之間無重組現(xiàn)象;H1N1pdm病毒6個蛋白位點在病毒進化過程中經(jīng)歷了陽性選擇。廣州流行的H1N1pdm病毒在不斷進化,需要持續(xù)監(jiān)測H1N1pdm病毒,預防該病毒的流行。
【圖文】：

圖３－１部分病例擴增結果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ｃａｓｅｓ逡逑ａｒｋｅｒ；邋Ｌａｎｅ邋１－６，樣品編號邋１０１、１０７、１０８、１２６、１５６、看出，應用一對引物可以對樣品的８個節(jié)段進行有效打下了基礎。逡逑基酸變異分析逡逑白的基因大小為１７４２－１７７８ｂｐ，邋ＨＡ蛋白由５６６個氨基個分離株出現(xiàn)了邋２３個氨基酸置換（表３－１）。本次試株與Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（ｍＮｌ）比對，，在受體結合位點

邐１逡逑０．０５逡逑圖３－２邋ＨＩＮＩ病毒ＨＡ序列進化樹逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－２邋ＨＡ邋ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ邋ｔｒｅｅ邋ｏｆ邋ＨＩＮＩ邋ｖｉｒｕｓ逡逑從圖中，我們可以看出：隨著流行時間的延長，Ｈ１Ｎ１病毒株的遺傳距離增逡逑力口。我們所測的病例ＨＡ序列，與以往流行株之間遺傳距離增加至可以分為兩個逡逑分支，即邋Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ邋２０１６Ａ邋和邋Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ邋２０１６Ｂ，而邋Ｇ?
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R373.13

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本文編號：2703397