【摘要】：目的心肌梗死的修復過程與梗死區(qū)內是否有血管迅速生成或殘留的血管是否重新開放密切相關,心肌梗死后快速建立良好的側支循環(huán)來改善梗死區(qū)血液供應,促進梗死區(qū)心肌的存活具有非常重要的意義。探討miR-101對急性心肌梗死模型血管新生的影響及其相應的調控機制。方法(1)采用miRNA qRT-PCR檢測在模擬缺氧條件下人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中mi R-101的表達量變化。(2)分別用EdU實驗、劃痕實驗、小管形成實驗檢測miR-101對HUVECs細胞增殖、遷移和血管新生能力的影響。(3)采用mi Randa、miRMap等12個生物信息學軟件預測miR-101的靶基因及與真核細胞翻譯起始因子4E3(eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E3)3’端非編碼區(qū)(3’-untranslated region,3’-UTR)的結合位點。(4)雙熒光素酶報告基因實驗檢測miR-101與EIF4E3 3’-UTR的直接結合并抑制EIF4E3表達的能力。(5)Western blot檢測內皮細胞轉染mi R-101 agomi R-101,antagomiR-101,scrambled RNA及EIF4E3 siRNA后,檢測EIF4E3及EIF4E1、HIF-1α、VEGF-A的表達。(6)在心肌梗死C57BL/6小鼠模型體內注射純化的Adv-miR-101干擾及空載體腺病毒,免疫熒光染色檢測心肌血管內皮細胞增殖情況(CD31/Ki67)和血管密度(CD31/α-SMA),并用M型超聲檢測小鼠心功能變化。結果(1)在CoCl_2誘導的缺氧狀態(tài)下,內皮細胞中miR-101表達在5d內較未缺氧時增高(p0.05)。(2)缺氧狀態(tài)下,agomiR-101組與antagomiR-101組和scrambled RNA組相比可顯著促進內皮細胞增殖、遷移和網(wǎng)狀結構形成(p0.05)。(3)生物信息學軟件預測和雙熒光素酶報告基因檢測證實了mi R-101可靶向結合EIF4E3 3’-UTR并抑制其表達(p0.05)。(4)采用siRNA干擾EIF4E3表達,Western Blot檢測HIF-1α和VEGF-A表達量較對照組顯著上調(p0.05)。分別用agomiR-101、antagomiR-101和scrambled RNA干預HUVECs生長,agomiR-101組較antagomi R-101組和scrambled RNA組EIF4E3表達量顯著下降,HIF-1α和VEGF-A表達量較對照組顯著上調(p0.05)。(5)用Adv-miR-101干預C57BL/6小鼠心肌梗死模型,Adv-miR-101能促進了血管內皮細胞增殖,增加心肌血管密度,從而改善心功能(p0.05)。結論MiR-101可通過抑制EIF4E3表達,促進HIF-1α和VEGF-A表達,調節(jié)內皮細胞增殖、遷移和血管新生,這可能為缺血性心臟病的治療提供一種新方法。
【圖文】：

實驗僅一個變量時采用單因素方差分析，兩個及多個變量時采用多因素方差分析，兩組間比較采用雙側不配對 t 檢驗。當 p 小于 0.05 時，說明差異具有統(tǒng)計學意義。結果1 EdU 檢測各組細胞增殖能力使用 EdU 試劑盒標記 agomir-101 組、antagomir-101 組及 scrambledRNA 組增殖 48h 的 HUVECs 進行標記。用熒光顯微鏡采集圖像結果（圖 1.1），綠色的細胞核為 EdU 染色，藍色的細胞核為 Hochest 染色，細胞核被染為綠色的細胞為正在增殖的 HUVECs。觀察發(fā)現(xiàn)，，scrambled RNA 組 HUVECs 被綠色標記的細胞數(shù)較少；agomir-101組與scrambledRNA組相比，被EdU標記細胞數(shù)顯著增加（p<0.05），antagomir-101 組與 scrambled RNA 組相比，被 EdU 標記細胞數(shù)顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）（圖 1.2）。

圖 1.2 EdU 實驗檢測 miR-101 對 HUVECs 增殖狀況的影響 1.2 The effect on proliferation rate of HUVECs after miR-101 transfecdetected by EdU Incorporation Assay.*, p < 0.05; **, p < 0.01驗條件下，分別將 agomiR-101，antagomiR-101，scrambled R中，于 48h 后 EdU 實驗檢測細胞修復能力（圖 1.3），與 scr較，agomiR-101 促進了 HUVECs 遷移能力（p<0.01），而 ant復能力有輕度抑制作用，具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。（圖 1
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R542.22;R-332

【參考文獻】

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1 金鑫;陳玉成;劉偉強;王浩宇;王斌;曾智;;雌激素促大鼠急性心肌梗死后心肌血管生成及受體介導機制[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2008年03期

本文編號：2703217