【摘要】：大鼠的胰腺是一種類似脂肪質(zhì)地、內(nèi)部呈網(wǎng)狀、但其顏色較脂肪淡、位于腹腔深處的腺體器官。在腹腔中,胰腺位于肝下方,與胃、十二指腸以及脾相連,其上有豐富的血管網(wǎng)絡(luò),胰腺外有間質(zhì)細(xì)胞形成的包膜,包膜將胰腺分割成胰腺小葉。胰腺小葉主要由腺泡、導(dǎo)管和胰島組成。其中泡心細(xì)胞存在的腺泡腔由單層腺泡細(xì)胞圍成,形成大小不等的腔隙,同時(shí),腔隙也存在于胰島細(xì)胞與相鄰的腺泡細(xì)胞之間,胰島細(xì)胞間小管存在于胰島細(xì)胞之間。被包膜包裹著的胰島細(xì)胞主要包括4種細(xì)胞,其中胰島β細(xì)胞主要分泌胰島素。另外,胰腺組織中也有成纖維細(xì)胞和較為豐富的毛細(xì)血管。胰腺大體上可以被劃分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,外分泌腺主要產(chǎn)生胰液,包含多種消化酶,分泌后的胰液從胰管流入十二指腸;內(nèi)分泌腺主要是由幾種細(xì)胞構(gòu)成的胰島,分泌兩種動態(tài)調(diào)節(jié)血糖變化水平的激素。研究已經(jīng)證實(shí)糖尿病主要是由胰島內(nèi)分泌功能紊亂而引起的,而消化系統(tǒng)疾病則是由胰腺外分泌的功能失調(diào)而致。因此,通過成熟有效的胰島分離提取方法得到大量具有生物學(xué)活性的胰島,并通過胰島移植來達(dá)到救治糖尿病病人的目的顯得格外重要。在動物模型中應(yīng)用膽管灌注法分離提取胰島較傳統(tǒng)的方法來說,具有高效率和高活性的優(yōu)點(diǎn),但是其操作較傳統(tǒng)的胰島提取方法更繁瑣和復(fù)雜。近年來,不少課題組在分離提取操作上做了一些改進(jìn),并對分離提取的胰島冷凍保存進(jìn)行了嘗試,為后續(xù)對糖尿病患者胰島移植的研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本論文中,我們借鑒已有的膽管灌注分離胰島的方法,在此基礎(chǔ)上對結(jié)扎處進(jìn)行改良,將近十二指腸處的結(jié)扎改為膽管和胰管開口附近兩端十二指腸上結(jié)扎,最大程度的保留胰管運(yùn)送膠原酶,從大鼠胰腺組織中分離提取胰島細(xì)胞,并利用胰島特異染色法鑒定所分離的胰島細(xì)胞的完整度。本實(shí)驗(yàn)中,以Wistar雄性大鼠作為實(shí)驗(yàn)對象,選擇0.2%V型膠原酶,酶濃度相對于現(xiàn)有報(bào)道較高,采取傳統(tǒng)的剪切法和經(jīng)過上述改良的膽管灌注法分離提取胰島后,利用二乙酸熒光素(Fluorescein diacetate,FDA)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色方法檢測和比較兩種方法提取的細(xì)胞存活率。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)膽管灌注法提取的胰島細(xì)胞半小時(shí)內(nèi)的活性明顯高于剪切法提取的胰島細(xì)胞活性。另外,對分離提取的胰島細(xì)胞分別用低糖和高糖刺激,利用ELISA檢測胰島素的分泌,結(jié)果顯示,與剪切法相比,改良后的膽管灌注分離得到的胰島細(xì)胞可以對高濃度葡萄糖刺激產(chǎn)生正常應(yīng)激反應(yīng)而分泌胰島素,說明分離提取后的胰島細(xì)胞仍保持正常的胰島分泌功能。再次,我們對兩種不同方法分離提取的胰島細(xì)胞在顯微鏡下進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn),利用改良的膽管灌注法提取的胰島,其包膜破碎的現(xiàn)象較少。最后,我們利用RT-q PCR方法通過檢測膽管灌注法分離提取的胰島分泌蛋白質(zhì)激素的m RNA水平來評估胰島的活性和功能。綜上,本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果證明利用我們改良的膽管灌注法提取的胰島細(xì)胞活性和分泌功能較剪切法更為有效。本研究將為后續(xù)臨床研究糖尿病治療奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1.1 人的胰腺結(jié)構(gòu)剖析圖胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩大部分。外分泌腺主要產(chǎn)生胰液，即多種，分泌后的胰液從胰管流入十二指腸。胰腺的內(nèi)分泌腺細(xì)胞團(tuán)被包膜包是由胰島細(xì)胞組成[2]。胰島大概占總胰腺質(zhì)量的 1-2％，其主要功能是通胰島素和胰高血糖素，參與調(diào)節(jié)碳水化合物，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)來源的各種營的儲存和利用[3]。胰島細(xì)胞主要分為胰島 α 細(xì)胞和胰島 β 細(xì)胞。兩種細(xì)胞在不同種屬胰島布有所區(qū)別。如，在小鼠和其他嚙齒動物的胰島核心部分主要被β細(xì)胞所而α細(xì)胞聚集在外圍區(qū)域[5,6]。而在人類和其他靈長類胰島中，α細(xì)胞并于外圍，可以分布在胰島的不同位置[7]。在狗和豬胰島中，β細(xì)胞和α細(xì)

第 1 章 緒論各半分布，而在猴子的胰島中，α細(xì)胞不規(guī)則的在內(nèi)部核心處散在出現(xiàn)[島的β細(xì)胞主要聚集在中心核和初級內(nèi)分泌細(xì)胞中，而α細(xì)胞占據(jù)胰島，但在該區(qū)域也能觀察到β細(xì)胞。胰島中還有一種細(xì)胞叫 pp 細(xì)胞，主胰島邊緣，偶爾會擴(kuò)散到胰島的內(nèi)部，但是，大多數(shù) pp 細(xì)胞集中在胰區(qū)域[10,11]。大鼠的胰腺是脂肪質(zhì)地、網(wǎng)狀、顏色較脂肪淡但密度較脂肪大的組織，腹部肝下方，與胃、十二指腸以及脾相連，，其上有豐富的血管網(wǎng)絡(luò)[12]。間質(zhì)細(xì)胞形成的包膜，其將胰腺分割成胰腺小葉，胰腺小葉由腺泡、導(dǎo)組成。如圖 1.2 所示，胰島細(xì)胞主要包括α細(xì)胞、β細(xì)胞（朗格漢斯胰島胞和 pp 細(xì)胞等[13,14]。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1;R-332

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本文編號：2699706