【摘要】：目的糖基轉(zhuǎn)移酶是神經(jīng)發(fā)育過程中的較為重要的一類酶,并且逐漸成為研究熱點,β-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶2(β-1,3-galactosyltransferase 2,B3galt2)屬于β-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶家族,是糖基轉(zhuǎn)移酶中的主要類型之一。通過探究β-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶2基因敲除對由衰老引起的海馬神經(jīng)炎癥的影響,進(jìn)而闡明B3galt2基因在老年小鼠的海馬中對神經(jīng)炎癥的調(diào)控作用,從而為進(jìn)一步研究B3galt2及其它糖基轉(zhuǎn)移酶在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用提供理論依據(jù)。方法應(yīng)用B3galt2基因敲除雜合子小鼠繁育并通過PCR基因型鑒定的方法獲得來自同一窩、相同性別的12個月野生型、雜合子和純合子小鼠,應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法和蛋白印跡法觀察海馬區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞和相關(guān)炎癥因子IL-1β和TNFα的變化。通過免疫熒光染色法觀察衰老小鼠海馬區(qū)域Aβ淀粉蛋白和MAP2的表達(dá)變化。結(jié)果1、通過B3galt2基因敲除小鼠雜合子的合籠繁育,成功獲得來自同一窩及相同性別的野生型、雜合子和純合子小鼠。2、B3galt2基因敲除會降低衰老小鼠海馬區(qū)域IL-1β和TNF-α等炎癥因子的表達(dá)水平。3、B3galt2基因敲除會導(dǎo)致衰老小鼠海馬區(qū)域活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量下降。4、B3galt2基因敲除增加衰老小鼠海馬區(qū)域Aβ淀粉蛋白的沉積。5、B3galt2基因敲除導(dǎo)致衰老小鼠海馬區(qū)域樹突相關(guān)蛋白MAP2的表達(dá)降低。結(jié)論1、B3galt2基因敲除后減弱衰老小鼠海馬區(qū)域的神經(jīng)炎癥反應(yīng)。2、B3galt2基因敲除后小膠質(zhì)細(xì)胞活化減少、Aβ淀粉蛋白沉積增多,MAP2蛋白表達(dá)減少。3、B3galt2基因敲除后可能減弱對衰老小鼠海馬區(qū)域的神經(jīng)保護(hù)作用。
【圖文】：

85%乙醇1min，95%乙醇1min（2次），無水乙醇1min（2次），二甲苯1min（2次），中性樹膠封片，顯微鏡觀察分析。6、統(tǒng)計學(xué)分析所有實驗至少獨立重復(fù)三次。數(shù)據(jù)表示為Means ± STDEV。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS23.0建立數(shù)據(jù)庫。免疫組織化學(xué)以及蛋白印跡實驗數(shù)據(jù)分析均采用單因素方差分析（One-way ANOVA）。P<0.05時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié) 果一、B3galt2 基因敲除小鼠 PCR 基因型鑒定為了獲得 B3galt2 基因敲除純合子小鼠，我們利用 B3galt2 基因敲除雜合子小鼠進(jìn)行繁育，剪取 1cm 左右出生 1 個月的小鼠尾部組織，，利用 PCR 基因型鑒定的方法對新生的小鼠進(jìn)行基因型鑒定，鑒定結(jié)果如圖 1 所示，野生型在 107bp處表達(dá)，純合子在 403bp 處表達(dá)，雜合子同時在 107bp 和 403bp 處表達(dá)。

二、老年小鼠海馬區(qū)域 HE 染色結(jié)果HE 染色是觀察組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)與病理變化最直接有效的方法，我們通過對不同基因型的老年小鼠海馬部位進(jìn)行 HE 染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn) B3galt2 基因純合子、B3galt2基因雜合子和野生型的老年小鼠 HE 切片無明顯區(qū)別，細(xì)胞排列均整齊，細(xì)胞間距適中，未見有明顯的細(xì)胞水腫、變性和壞死等情況。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R741;R-332

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本文編號：2689367