【摘要】：目的探究老年腰骶脊髓中的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黃遞酶(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase,NADPH-d)反應(yīng),進(jìn)一步確定老年大鼠腰骶脊髓中出現(xiàn)的NADPH-d陽(yáng)性異常結(jié)構(gòu)是否出現(xiàn)在狗和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的腰骶脊髓。方法實(shí)驗(yàn)選取年輕(小于2年)和老年(10年以上)兩種性別的家狗各8只,年輕(小于5年)和老年(15年以上)兩種性別的食蟹猴各8只。這些動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前都是健康的并且無(wú)任何神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。狗脊髓組織分別進(jìn)行NADPH-d組織化學(xué)染色,NADPH-d組織化學(xué)染色復(fù)合NeuN,CGRP,VIP,GFAP免疫熒光雙標(biāo),以及骶段脊髓切片進(jìn)行VIP免疫組織化學(xué)染色。猴脊髓組織分別進(jìn)行NADPH-d組織化學(xué)染色,NADPH-d組織化學(xué)染色復(fù)合CGRP,VIP,NPY免疫熒光雙標(biāo)。結(jié)果NADPH-d組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在老年狗和猴骶段脊髓的背角(Dorsal horn,DH),背根進(jìn)入?yún)^(qū)(Dorsal root entry zone,DREZ)和灰質(zhì)背連合(Dorsal gray commissure,DGC),特別是S1-S3脊髓節(jié)段利紹氏束(Lissauer's tract,LT)的外側(cè)束通路(Lateral collateral pathway,LCP)中,發(fā)現(xiàn)了一種新的腫脹的纖維樣NADPH-d陽(yáng)性反應(yīng),將其命名為NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維(Megaloneurite),這與正常的NADPH-d陽(yáng)性纖維完全不同。這些密集的,異常的NADPH-d碩變神經(jīng)纖維發(fā)生在從背根進(jìn)入?yún)^(qū)通過(guò)LT沿著DH外側(cè)邊緣到達(dá)骶副交感核(Sacral parasympathetic nucleus,SPN)和/或通過(guò)內(nèi)側(cè)束通路(Medial collateral pathway,MCP)到達(dá)DGC的區(qū)域。在老年狗和猴骶尾段脊髓橫切面的DREZ和LCP外側(cè)的白質(zhì)中,檢測(cè)到與正常的神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞極為不同的高密度的點(diǎn)狀NADPH-d反應(yīng),這些異常的NADPH-d反應(yīng)在水平切面上呈現(xiàn)出與NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維相同的形態(tài)。在老年狗尾段中央管(Central canal,CC)內(nèi)發(fā)現(xiàn)另一種膨大腫脹的NADPH-d陽(yáng)性異常結(jié)構(gòu),這些不規(guī)則的強(qiáng)染的NADPH-d陽(yáng)性異常結(jié)構(gòu),與正常的神經(jīng)元不同,呈團(tuán)塊狀或纖維束狀出現(xiàn)在CC周圍,被認(rèn)為是NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維的一種變異。此外,在老年猴的薄束核也檢測(cè)到密集的球形NADPH-d陽(yáng)性退變結(jié)構(gòu)。NADPH-d組織化學(xué)復(fù)合NeuN,CGRP,VIP,GFAP,NPY免疫熒光雙標(biāo)的結(jié)果表明,NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維在DREZ,LCP,DGC以及CC周圍與VIP免疫反應(yīng)發(fā)生共定位,但是不與NeuN,CGRP,GFAP,NPY免疫熒光共定位。老年狗骶段脊髓VIP免疫組化實(shí)驗(yàn)表明,MCP中也有少量碩變神經(jīng)纖維出現(xiàn)。結(jié)論老年狗和猴骶段脊髓出現(xiàn)大量的NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維,其主要分布在DREZ,DGC,LCP,MCP和CC周圍,不出現(xiàn)在頸段,胸段和上腰段脊髓。NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維與VIP免疫反應(yīng)共定位,并且僅出現(xiàn)在老年動(dòng)物骶段脊髓,而不出現(xiàn)在年輕動(dòng)物中。這些碩變神經(jīng)纖維可能與骶段脊髓的跨神經(jīng)節(jié)纖維的腫脹有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,NADPH-d陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維可能作為一種特殊的衰老標(biāo)志物,與老年盆腔臟器功能減退和疾病有關(guān)。
【圖文】：

圖 2 NADPH-d 反應(yīng)在老年狗各脊髓節(jié)段中的分布注：A，B：老年狗頸段脊髓中的 NADPH-d 反應(yīng)；C，D：老年狗胸段脊髓中的NADPH-d 反應(yīng)；E，F(xiàn)：老年狗腰段脊髓中的 NADPH-d 反應(yīng)；G，H：老年狗骶段脊髓中的 NADPH-d 反應(yīng)；I：NADPH-d 反應(yīng)在各脊髓節(jié)段分布模式圖；綠色線條：碩變神經(jīng)纖維；紅色三角：白質(zhì)中的異常結(jié)構(gòu)；黑色圓點(diǎn)：NADPH-d 陽(yáng)性神經(jīng)元；DH：背角；LCP：外側(cè)束通路；IML：中間外側(cè)柱；DGC：灰質(zhì)背連合；CC：中央管；空心箭頭：NADPH-d 神經(jīng)元；黑色長(zhǎng)箭頭：正常 NADPH-d 陽(yáng)性神經(jīng)纖維；黑色箭頭：碩變神經(jīng)纖維；標(biāo)尺：A，C，E，G=200μm，B，D，F(xiàn)，，H=50μm。二、老年狗骶段脊髓中 GFAP，NeuN，CGRP 和 VIP 免疫反應(yīng)的表達(dá)NADPH-d 組織化學(xué)復(fù)合 GFAP，NeuN，CGRP 和 VIP 免疫熒光，用于鑒定碩變神經(jīng)纖維的性質(zhì)。GFAP，NeuN 或 CGRP 免疫熒光未檢測(cè)到與 NADPH-d 陽(yáng)性碩變神經(jīng)纖維相對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)（圖 3A-I）。VIP 免疫反應(yīng)與 NADPH-d 陽(yáng)性

、老年狗骶段脊髓中 VIP 免疫反應(yīng)的表達(dá)VIP 免疫組織化學(xué)研究表明，在老年狗骶段脊髓的 DH，DCP，觀察到與 NADPH-d 組織化學(xué)染色相同的碩變神經(jīng)纖維（）。同時(shí)，我們?cè)谥醒牍苤車l(fā)現(xiàn)一些與室管膜細(xì)胞相接觸的（圖 4G-I）。此外，在 MCP 中也可以偶然檢測(cè)到 VIP 陽(yáng)性碩A，B）。這些 VIP 免疫反應(yīng)纖維的走行與 NADPH-d 陽(yáng)性碩變神表了盆腔內(nèi)臟反射通路的一部分。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R322.8

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本文編號(hào)：2686464